بررسی میزان آدنوزین تری فسفات در اسپرم مولدین ماهی کفال طلایی در شرایط مختلف
( محل انجام پژوهش، پژوهشکده اکولوژی دریای خزر، ساری، ایران)
چکیده:
کفال ماهیان دریای خزر یکی از مهمترین ماهیان شیلا تی این دریا می باشند که امروزه اکثریت صید ماهیان دریای مذکور به خود اختصاص داده اند.: هدف از این تحقیق بررسی میزان ATP اسپرم ماهی کفال طلایی1 در شرایط زمانی، دمایی و تداوم بخش2های مختلف بوده است.: بدین منظور میزان ATP اسپرم های:
1) نمونه های تازه در دماهای مختلف 10-12 درجه و 18-20 درجه سانتی گراد،
2) نمونه های نگهداری شده در دماهای مختلف4 (درجه و دمای اتاق) به مدت شش ساعت،
3) نمونه های نگهداری شده در ( تداوم بخش های مختلف ( گلیسرول، محلول نمک 7/0 %، محلول نمک 65/0%) به مدت 5 و 10 روز، به روش فوق حساس بیو- لومینوسانس اندازه گیری گردید.
بر اساس آزمایش های انجام شده در این تحقیق غلظت ATP اسپرم های تازه نمونه گیری شده در دمای 10 تا 12 درجه سانتیگراد 22/7 ±04/74% غلظت ATP اسپرم های تازه نمونه گیری شده در دمای 18 تا 20 درجه بود. اسپرم های نگهداری شده در دمای 4 درجه و دمای آزمایشگاه به مدت 6 ساعت به ترتیب 91/0 ±26/90% و 49/1 ±17/17% ATP خود را حفظ کردند.
نگهداری اسپرم در تداوم بخش های مختلف( گلیسرول، محلول نمک 7/0 %، محلول نمک 65/0% ) به مدت 5 روز نشان داد که گلیسرول و محلول نمک 65/0% درصد بالاتری از ATP را نسبت به محلول نمک 7/0% حفظ کردند و نگهداری اسپرم در همان تداوم بخش ها به مدت 10 روز نشان داد که گلیسرول درصد بالاتری از ATP را نسبت به محلول نمک 7/0% و 65/0% حفظ کرد.
براساس نتایج بدست آمده برای حفظ میزان ATP اسپرم ماهی کفال طلایی نمونه گیری در دمای 18-20 درجه و نگهداری در گلیسرول توصیه می شود.
واژگان کلیدی: اسپرم، ماهی کفال طلایی، ATP،
مقدمه:
اسپرم به عنوان یک عامل مهم تولید مثل، بقاء و تداوم نسل است. بررسی اسپرم از نظر پارامترهایی چون توانایی تلقیح، تحرک، درصد اسپرم های متحرک، سرعت حرکت، فرکانس ضربه تاژکی، میزان ATP و فاکتورهای شیمیایی و بیو شیمیایی، در تشخیص کیفیت اسپرم و کنترل روند تولید مثلی موجودات زنده از جمله آبزیان به ما کمک می کند. به همین علت تاکنون تحقیقات گسترده ایی توسط پژوهشگران مختلف روی این سلول صورت گرفته است. با این حال مطالعات انجام شده در ارتباط با میزان ATP اسپرم ماهیان نسبتا کم است. این امر تفسیر علت ناموفق بودن پروژه های پرورشی کردن برخی ماهیان را دشوار می کند. در این رابطه باید مطالعات بیشتری در زمینه بررسی میزان ATP اسپرم ماهیان صورت پذیرد. اسپرم به کمک حرکت ضربه ایی تاژک خود شنا می کند. انرژی مورد نیاز برای این حرکت از طریق هیدرولیزATP فراهم می شود.(1).تحرک اسپرم به میزان ATP ذخیره ایی اولیه(2) و میزان ATP سنتز شده در طول فاز تحرک (3) وابسته است. در اکثر ماهیانی که دارای لقاح خارجی هستند،ATP سنتاز قادر به نگهداری نسبت های بالای ATP هیدرولیز شده مورد نیاز در طول حرکت نیست لذا میزان ATP به سرعت کاهش می یابد. این کاهش ATP به موازات کاهش تعداد ضربات تاژکی و سرعت حرکت اسپرم است(2). یک رابطه خطی بین ظرفیت تلقیح اسپرم و پارامترهای اسپرمی از جمله میزان ATP و سرعت حرکت اسپرم وجود دارد(4) آنزیم اصلی تبدیل انرژی شیمیایی گرادیان پروتون در سیستم بیولوژیکی ، ATP سنتتاز است. این آنزیم برای سنتز ATP از ADP و فسفات غیرآلی استفاده می کند ساختمان و عملکرد این آنزیم در گونه های مختلف یکسان است (5) تفاوت قابل توجهی بین گونه ها در مقدار ATPمورد نیاز برای تامین حرکت اسپرم وجود دارد(6). تحقیقی در رابطه با میزان ATP اسپرم ماهی کفال طلایی تاکنون صورت نگرفته است. در این پروژه سعی بر آن داشتیم که میزانATP اسپرم ماهی کفال طلایی را در شرایط مختلف اندازه گیری نماییم.
مواد و روشها:
به منظور بیان میزان ATP برحسب تعداد سلول ، تعداد اسپرم های موجود در یک میلی لیتر از مایع اسپرم اخذ شده از 10 ماهی نر کفال طلایی ، به کمک لام نئوبار و میکروسکوپ نوری (NIKON Y100) مورد شمارش قرار گرفت. در این تحقیق جهت بررسی تاثیر دمای نمونه گیری و میزان ATP اسپرم ماهی ، نمونه گیری در دو دمای ◦C 10-12 و18-20 ◦C انجام شد . ما در این تحقیق برای اندازه گیری میزان ATP از روش بیولومینوسانس استفاده کردیم بدین شکل که نمونه اسپرم را به نسبت 100/1 در محلول بافر HEPES جوشان مخلوط کرده سپس 50 از آن را با 50 از محلول کیت حساس بیولومینو سانس (Biaffin) در پلیت مخصوص اندازه گیری لومینوسانس با هم مخلوط کرده و سینگالهای لومینوسانس را با استفاده از دستگاه لومینومتر
10-19 mol/well, Germany) × (Lumistar ,BMG labtech GmbH, 5اندازه گیری کرده و سپس میزان ATP هرنمونه را با استفاده از استانداردهای ATP محاسبه کرده و بصورت nmol/108 اسپرم بیان کردیم.
درجه حرارت نگهداری اسپرم ها بر میزان ATP سلول های مذکور تاثیرگذار خواهد بود. لذا جهت بررسی دمای مناسب نگهداری ، اسپرم ها به مدت 6 ساعت در دمای 4 درجه و دمای آزمایشگاه نگهداری و سپس میزان ATP آن ها مورد اندازه گیری قرار گرفت. معمولا برای نگهداری اسپرم از محلول های تداوم بخشExtenders )) استفاده می کنند این محلول ها سبب تداوم و حفظ فعالیت اسپرم ها در دوره نگهداری می شوند. به منظور بررسی بهترین محلول تداوم بخش ، محلول گلیسرول 10 درصد و گلوکز 0.3 مولار ، محلول نمک 0.7 درصد و محلول نمک 0.65 درصد مورد بررسی قرار گرفتند . میزان ATP اسپرم ها در محلول های مذکور پس از نگهداری اسپرم در دمای منفی 15 درجه در زمان های 5 و 10 روز مورد سنجش قرار گرفت.
جهت انجام تحقیق در روز دهم آبان 1384از دریاچه خزر که دمای آب آن 18 تا 20◦C و شوری آن 12 تا 13 ppm بود و همچنین در روز 17 آبان 1384 در پی کولاک و کاهش چشمگیردمای هوا از دریاچه خزرکه دمای آب آن 10 تا 12 ◦C و شوری آن 12 تا ppm 13
بود تعدادی ماهی کفال طلایی صید کرده و پس از تعیین جنسیت، نمونه های نری را که هنوز اسپرم ریزی نکرده بودند انتخاب نموده و از بین آنها از 10 ماهی نر با طول تقریبی25 تا 30cm و وزن 900 تا 1100g نمونه گیری شد. بعد از نمونه گیری ، بلافاصله درب لوله های آزمایش توسط نوار پارافیلم محکم بسته شده و در جعبه یخ 4 ◦C به آزمایشگاه منتقل شدند. در واقع اسمولالیته پائین ادرار با تحریک اولیه موجب کاهش اولیه ذخیره ATP سلولی و کاهش کیفیت اسپرم کپور می شود. لذا ما برای ممانعت از کاهش کیفیت اسپرم، در طول نمونه گیری از آلوده شدن اسپرم به ادرار و هر گونه ماده آلوده کننده ای جلوگیری کردیم.
به منظور بررسی میزان ATP نمونه اسپرم نگهداری شده در شرایط آزمایشگاه و دمای 4 ◦C به مدت 6 ساعت، مقداری از نمونه اسپرم هر ماهی که در دمای 10 تا ◦C 12 نمونه گیری شده ، در شرایط آزمایشگاه (22 ◦C) و مقداری در دمای ◦C 4 نگهداری شد. همچنین به منظور بررسی میزان ATP نمونه اسپرم نگهداری شده در سرما در تداوم بخش های مختلف (محلول گلیسرول 10% و گلوکز 3/0 مولار، محلول نمک 7/0% ، محلول نمک 65/0% ) بعد از 5 و 10 روز ، یک حجم از اسپرم را با سه حجم از محلول تداوم بخش به آرامی مخلوط نموده و نمونه های اسپرم مخلوط شده با گلیسرول و محلول نمک 65/0% در دمای -15 ◦C و نمونه های مخلوط شده با محلول نمک 7/0% در دمای 1◦C بالای یخچال نگهداری شد.
برای بررسی میزان ATP نمونه اسپرم های تازه نمونه گیری شده (در دمای 18 تا ◦C 20 و 10 تا ◦C 12 آب دریا) و نگهداری شده (در دمای آزمایشگاه (22◦C) و◦C 4)، ابتدا باید نمونه اسپرم هرماهی را به نسبت 1:100درمحلول بافر HEPES(pH=7.7, EDTA 2 mM , ( 25 mM HEPES , 10 mM Magnesium Chloride در میکرو ویال رقیق کرد. سپس میکرو ویال را در حمام آب جوش ◦C 100قرار داده تا در اثر حرارت، محتوی میکرو ویال شروع به جوشیدن کند. پس از کمی جوشیدن محتوی میکرو ویال، آنرا خارج کرده ، که در حقیقت در اثر این حرارت غشاء سلول اسپرم تجزیه شده و ATP سلول آزاد میشود(8). درمرحله بعد به 50 از محلول کیت حساس بیو لومینوسانس ( کیت شامل دو محلول و دو پودر جامد می باشد که محلول های آن شامل لوسیفراز وبافر است سپس پودرهای جامد که شامل دی تیوتریتیول (DTT)و لوسیفرین می باشد را طبق دستور بروشور کیت باهم مخلوط کرده و یک مخلوط نهایی به دست می آید که برای انجام آزمایش می بایست 50 میکرولیتر از این مخلوط نهایی با 50 میکرو لیتر از محلول مورد اندازه گیری باهم در پلیت اندازه گیری لومینوسانس مخلوط کرد. کیت حساس بیولومینوسانس ساخت شرکت Biaffin آلمان می باشد). سیگنالهای لومینوسانس در دمای اتاق به کمک دستگاه لومینومتر بعد از 10 دقیقه اندازه گیری شدند.و افزایش این زمان به بیش از 30 دقیقه سبب کاهش سیگنال و عدم اعتبار منحنی استاندارد خواهد شد. سپس پلیت را وارد دستگاه لومینومتر کرده تا سیگنالهای لومینوسانس را اندازه گیری نماید. در مرحله بعد سیگنالهای لومینوسانس را بر اساس استانداردهای ATP به صورت nM ATP درآورده و در نهایت غلظتATP هر نمونه اسپرم ماهی را بصورت nM ATP به ازای 108 اسپرم بیان کردیم.
به منظور بررسی میزانATP نمونه اسپرم نگهداری شده در سرما و تداوم بخش های مختلف بعد از 5 و10 روز، ابتدا نمونه های منجمد شده در دمای ) -15 ◦C (نمونه نگهداری شده در گلیسرول و محلول نمک ( 65/0% از فریزر خارج کرده و به مدت 30 ثانیه در دمای 37 ◦C قرار داده تا ذوب شوند( 9). مراحل آزمایش برای نمونه های نگهداری شده در سرما و تداوم بخش های مختلف بعد از 5 و 10 روز مجددا تکرار شدند.
نتایج:
نتیجه میانگین شمارش تعداد اسپرم های مذکور برحسب ×108 تعداد اسپرم به صورت زیر بود: ماهی اول : 220، دوم: 258، سوم: 245، چهارم:200، پنجم:290، ششم : 275، هفتم : 315، هشتم : 235، نهم:180، دهم:170 بود. نتایج بررسی اثر دما بر غلظت ATP در اسپرم ماهی کفال طلایی در نمودار شماره یک ارائه شده است . نتیجه بررسی اثر دما بر نگهداری اسپرم ماهی کفال طلایی در نمودار شماره 2 آورده شده است . نتیجه اندازه گیری تداوم فعالیت اسپرم ها در محلول های مختلف در نمودار شماره 3 ارائه شده است . روند تغییرات میزان ATP در محلول های مختلف تداوم بخش طی زمان نگهداری 10 روزه در نمودار شماره 4 آورده شده است . بررسی نتایج کسب شده نشان داد:
1- بررسی غلظتATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دماهای مختلف.
غلظت ATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دمای ◦C 10-12، 22/704/74% غلظت ATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دمای ◦C20-18 بود
(اسپرم نمونه گیری شده در دمای ◦C 20-18 ،sperm nmol/108 09/104/ 17، N=10 ، اسپرم نمونه گیری شده در دمای ◦C 12-10، sperm nmol/108
9/0 21/12 ، N=10 ، 05/0P> ).
2- بررسی غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در دماهای مختلف به مدت 6 ساعت بیشترین تحرک اسپرم وتوانایی آن برای تلقیح تخم بعد از نمونه گیری است. نتایج کسب شده از این تحقیق به مانشان داد که غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در دمای ◦C4 به مدت 6 ساعت091/26/90% غلظت ATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دمای ◦C12-10 بود که این تفاوت معنی دار نبود. ( 05/0<p n=10,). غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در دمای آزمایشگاه به مدت 6 ساعت غلظت ATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دمای ◦C 12- 10 بود که این تفاوت معنی دار بود(n=10, p<0/001 ).
3- بررسی غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در تداوم بخش های مختلف به مدت 5 روز.
غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در گلیسرول در دمای ◦C 15 – بعد از 5 روز ، غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 7/0% در دمای ◦C1 بعد از 5 روز و غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 65/0% در دمای ◦C 15- بعد از 5 روز به ترتیب 4/5 19/74 % ، 81/2 65/13 %، 68/6 58/73 % غلظت ATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دمای◦C 12-10 بود که این تفاوت معنی دار بود (n=10 , P<0/001) و گلیسرول و محلول نمک 65/0 % در صد بالاتری از ATP را نسبت به محلول نمک 7/0 % حفظ کردند. ضمنا در این زمینه تحقیق مشابهی یافت نشد.
4- بررسی غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در تداوم بخش های مختلف به مدت 10 روز.
غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در گلیسرول در دمای ◦C 15- بعد از 10 روز ، غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 7/0 % در دمای◦C1 بعد
از 10 روز و غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 65/0 % در دمای ◦C 15- بعد از 10 روز به ترتیب 2/6 67/47 % ، 6% 69/0% و 12/0 05/1 % غلظت ATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دمای◦C 12-10 بود که این تفاوت معنی دار بود (001/0 >P . n=10 ) و گلیسرول در صد بالاتری از ATP را نسبت به محلول نمک 7/0% و 65/0% حفظ کرد.
نگهداری اسپرم گربه ماهی اروپایی در شرایط انجماد با نگهدارنده در شرایط انجماد3 مختلف (سولفوکسید دی متیل Me2So ، دی متیل استامید DMA ، گلیسرول، متانول و گلیکول پروپیلن ) نشان داد که بهترین حفاظت در شرایط انجماد توسط DMA (15و10% )، ( So Me2 15%) فراهم شد.
5- بررسی غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در گلیسرول به مدت 5 و 10 روز.
غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در گلیسرول در دمای ◦C 15- بعد از 5 روز و غلظت ATP اسپرم های نگهداری شده در گلیسرول در دمای 15- درجه بعد از 10
روز به ترتیب 5/4 19/74 % و 2/6 67/47% غلظت ATP اسپرمهای تازه
نمونه گیری شده در دمای◦C 12-10 بود که این تفاوت معنی دار بود
(001/0>P وn=10 ).
6- بررسی غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 7/0% به مدت
5 و 10 روز.
غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 7/0% در دمای ◦C 1 بعد از5 روز و. غلظت ATP اسپرم های نگهداری شده در محلول نمک 7/0 % در دمای 1 درجه بعد از 10 روز به ترتیب 81/2 65/13 % و 6% 69/0 % غلظت ATP اسپرهای تازه نمونه گیری شده در دمای ◦C12-10 بود که این تفاوت معنی دار بود (001/0 >P , n=10).
7- بررسی غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 65/0% به مدت 5 و10 روز.
غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 65/0% در دمای ◦C 15- بعد از 5 روز و غلظت ATP اسپرمهای نگهداری شده در محلول نمک 65/0% در دمای ◦C 15- بعد از 10 روز به ترتیب 68/6 58/73% و 12/0 05/1% غلظت ATP اسپرمهای تازه نمونه گیری شده در دمای◦C12-10 بود که این تفاوت معنی دار بود
(001/0>P n=10) .
8- بررسی میانگین تعداد اسپرم در cc1 مایع اسپری.
میانگین تعداد اسپرم در cc 1 مایع اسپری108×15108 ×239 عدد است. (10=n).
بحث و نتیجه گیری
تحقیقات زیادی در ارتباط با اسپرم ماهی در جهان صورت گرفته است که هر کدام جنبه خاصی را مد نظر قرار داده است. محدودیت ها و مشکلات و عوامل موجب خطا به صورت زیر است : یکی از مشکلات و محدودیت های این پروژه، محدودیت زمانی بود زیرا این پروژه باید در طول فصل تولید مثل ماهی کفال طلایی که دو ماه می باشد انجام می شد هم چنین به علت بروز مشکلات غیرمترقبه در زمان انجام این پروژه ، به اواسط فصل تولیدمثل نزدیک شده در نتیجه اندازه گیری میزان ATP اسپرم ماهی کفال طلایی در دوره های نگهداری کوتاه مدت 5 و 10 روزه انجام شد که در صورت عدم وجود این محدودیت های زمانی ، اندازه گیری میزان ATP اسپرم درحا اطلاعات محدودی در مورد میزان ATP اسپرم ماهی و اثرات فاکتورهای محیطی و شیمیایی و بیوشیمیایی بر آن وجود دارد.
طبق گزارشات Perchec و همکارانش(10 ) در صورت آلوده نشدن اسپرم به ادرار، میزان ATP آن حدود اسپرم و در صورت آلوده شدن به ادرار، میزان ATP آن حدود اسپرم بود. برای اندازه گیری غلظت ATP، لوسیفرین – لوسیفر از ( حل شده در 100mM گلایسین، 20mM Mgso4، PH7/4) را به نمونه افزوده وسیگنالهای بیولومینوسانس را با استفاده از یک دستگاه
لومینومتر Lmax ، 96 چاهکی (Molecular, Devices Sunngvale,CA,USA) اندازه گیری می کنند و میزان ATP هر نمونه را با استفاده از استانداردهای ATP محاسبه می کنند
و بصورت Pmol/108 اسپرم بیان می شود.Ogier وهمکارانش(11)
میزان ATP را با استفاده از روش بیولومینوسانس(اندازه گیری بیولومینوسانس
Kit ClsII, ATP ،Boehringer-Mannheim ) ، پس از استخراج با یک تری کلرواستیک اسید2% ، mM2 EDTA، اندازه گیری کردند و بصورت nmol/108 اسپرم بیان کردند. Perchec و همکارانش (10) میزان ATP را بوسیله روش بیولومینوسانس اندازه گیری کردند به این شکل که اسپرم ماهی کپور معمولی را به نسبت 100/1 در بافر HEPES جوشان تجزیه کرده و سپس با افزودن لوسیفرین – لوسیفراز به اسپرم، سیگنالهای لومینوسانس را به وسیله (Biocounter M2010A Lumac/3M) اندازه گیری کردند و سپس میزان ATP را با استفاده از استانداردهای ATP محاسبه کردن و بصورت nmol/108 اسپرم بیان کرده اند. در مورد تلقیح مصنوعی گاهی نگهداری اسپرم لازم است . مدت زمان تحرک اسپرم نیز متاثر از دمای نگهداری است بطوریکه طبق گزارشات 12)) نگهداری کوتاه مدت (15 دقیقه) اسپرم در دمای ◦C 20، مدت زمان تحرکش را کاهش می دهد، آنها همچنین مشاهده کردند که میزان تحرک اسپرم کپور ماهی معمولی پس از 2 ساعت نگهداری در دمای ◦C 20 حدود 50% کاهش یافت. نتایج تحقیق این دو همکار نشان داد که امکان نگهداری اسپرم در یخچال (◦C 5 ) تا 24 ساعت برای ماهی کپور معمولی و تا 8 ساعت برای ماهی کپور علفخوار بدون کاهش قابل توجه کیفیت اسپرم وجود دارد. در مورد ماهی قزل آلا Oncorhynchus mykiss ، گزارش شده است که سطح ATP و میزان حرکت اسپرم این نوع ماهی بعد از ذوب بطور قابل توجهی کاهش می یابد. ولی Ogier و همکارانش گزارش کردند که اسپرم گربه ماهی اروپایی بدون کاهش سطح ATP خیلی متفاوت عمل می کنند. اسپرم منجمد شده گربه ماهی اروپایی با DMA موجب افزایش قابل توجه سطح ATP اسپرم می شود که این بدین علت است که DMA موجب تحریک مستقیم سنتز ATP می شود که این افزایش سطح ATP در طول فرآیند، احتمالاً یک عامل مهم در تحمل انجماد اسپرم گربه ماهی اروپایی در حالت وجود DMA باشد. ولی نتایج کسب شده از آزمایشات به ما نشان داد که در این تحقیق بهترین تداوم بخش گلیسرول 10% و گلوکز 3M/0 است. ضمنا تحقیق مشابهی در این رابطه یافت نشده است .
نتیجه گیری و پیشنهادات:
ماهی کفال طلایی یکی از گونه های مهم ماهیان شیلاتی است که تاکنون موفق به تکثیر و پرورش آن نشده اند شاید بتوان از این طریق برای فراهم آوردن شرایط مناسب به منظور تکثیر و پرورش این نوع ماهی و یا در شرایط خاص به منظور نگهداری اسپرم آن استفاده کرد.
نتایج این تحقیق مشخص کرد که نمونه گیری در دمای ◦C o 20- 18 برای اخذ اسپرم مناسب تر از دمای ◦C12-10 می باشد . نگهداری اسپرم های اخذ شده تا 6 ساعت در دمای 4 درجه مناسب تر از دمای آزمایشگاه می باشد. در استفاده از محلول های تداوم بخش ، محلول گلیسرول 10 درصد حاوی گلوکز 0.3 مولار از محلول های نمکی تداوم بخش در نگهداری محتوی ATP اسپرم ( در دمای منفی 15 درجه ) بهتر عمل می کند . بنابراین پیشنهاد می گردد اسپرم هایی ماهی کفال طلایی در محلول تداوم بخش گلیسرولی تا 10 روز در مقایسه با سایر محلول های نمکی صورت گیرد.
منابع:
1. Cosson J, Billard R, Cibert C, Drenno C, Suquet M. 1999, Ionic factors regulating the motility of fish sperm. In Gagnon C. (Ed), the male gamete: from basic science to clinical applications. Cache River press, Vienna, IL, PP.(1)161-186.
2. Christen F, Gatti J.L, Billard R, 1987, Trout sperm motility. The transient movement of trout sperm is related to changes in the concentration of ATP following the activation of fellagellar movement .Eur.J.Biochem.(3)166, 667-677.
3. Lahnsteiner,F,Berger,B.Weismann,T,1999,Sperm metabolism of the Teleost fishes Chalcalburnus chalcoides and Oncorhyncus mykiss and its relation to motility and viability.J.EXP.Zool.(2)284,454-465.
4. Zilli . L, Schiabone R, Zollo V, Storelli C, Vilella S, 2004 ATP constration & B-D- glucoronidas activity as indicator of sea bass semen quality, marin aqua calture & fishier reserch center (M.A.R.C).S Frigole-Lecce,(2)73100-Lecce.italic.
5. Nath.ATH S, Rohatgi Hand Saha A, 2005 ,The porsional torsiolal mecanism of energy transfers in ATP sentas , decartment of Biochimical engeniaring & Biotechnology , india insitute of technology , Hauz ksas, NewDelhi (1) 110016,india.
6. Mansour N, Lahnsteiner F, Berger B. 2003. Metabolism of intra-testicular spermatozoa of a tropical teleost fish (Clarias gariepinus). Comp. Biochem. Physiol, B(3) 135.285-296.
7. Liao NO Group, 2001, HEPES buffer preparation, competition experiment protocol.(3)1-4.
8. Billard R, Cosson J, Fierville F, Brune R, Rouault T and Willot P, 1999, Motility analysis and energetic of the Siberian sturgeon spermatozoa.J.Appl.Ichthyol.(4)15:199-203.
9. Pickett B W, Amann RP (1993) Cryopreservation of semen .in: Mckinnon Ao, Voss JL (Ed) Equine reproduction. Lea& Febiger, Philadelphia, PP(4) 769-789.
10. Perchec G, Jeulin C, Cosson J, Andre F, Billard R,1995,Relationship between sperm ATP content and motility of carp spermatozoa, Journal of cell science.(1)108,747-753.
11. Ogier B de Baulny, Labbe C, and Maisse G. 1999,Membrane integrity, mitochondrial activity, ATP content, and motility of the European catfish (Silurus glanis) testicular spermatozoa after freezing with different cryoprotectant, Academic press.(5)177-184.
12. Jezierska B, Witeska M. 1999, the effect of time and temperature on motility of spermatozoa of common and grass carp, Electronic Journal of polish agricultural universities.(6)1-8.
Determination of sperms ATP content of Golden grey mullet (Mugil auratus) at different conditions
(Performed at Ecology Institute of Khazar Sea, Sari, Iran)
Abstract:
Introduction: Caspian Sea Mugilidae is one of the most important fish of the sea fishery which nowadays is the predominant catches fish of the mentioned sea. ATP content of mentioned fish sperms is an important index of fish fertility.
Aim: Aim of this study was determination of sperm ATP content of Golden grey mullet in different time, temperature and extenders.
Materials & methods: Determination of samples ATP concentration was done by ultra sensitive bioluminescence method. ATP content of sperms were determined at two different sampling temperature(10-12 C and 18-20 C) and two different keeping temperature(4C and room temperature) for six hours, and also ATP content assayed until 10 days storage at three extender types(Glycerol, 0.7 and 0.65% salt solution).
Results: This study results showed that, ATP content of sperms, collecting at 10-12C was %74.04 7.22, in comparison to 18-20C. ATP content of Sperms during 6 hours keeping at 4C and room temperature were %90.26 0.91 and %17.171.49 respectively. Determination of Sperms ATP content after 5 days keeping on Glycerol, 0.65 and 0.7% salt solution revealed that Glycerol or 0.65% salt solution are better extender than 0.7% salt solution. But sperm keeping in mentioned extenders for 10 days showed that Glycerol was better than salt solutions in order to sperm ATP content saving.
Conclusion: Our results revealed that, in order to save sperms ATP content of Golden grey mullet, sampling at 18-20C and keeping in Glycerol as extender is recommend.
Keywords: Sperm, ATP, golden grey mullet
فهرست مطالب
چکیده: 2
مقدمه: 4
مواد و روشها: 5
نتایج: 9
بحث و نتیجه گیری 13
نتیجه گیری و پیشنهادات: 16
1 -Mugil auratus
2 -Extender
3 cryopropection
—————
————————————————————
—————
————————————————————
23