گزارش کاراموزی موسسه افات و بیماریهای گیاهی بخش علف های هرز



دانشگاه آزاد اسلامی واحد ابهر

موضوع تحقیق کارآموزی:
موسسه آفات و بیماری های گیاهی
بخش علفهای هرز

استاد راهنما :
جناب آقای دکتر پیری

تهیه کننده :
منصوره تقی پور

تابستان 87
مقدمه
وطن اصلی این گیاه آمریکای جنوبی است. درقرن شانزدهم در کشور پرو به مقدر زیاد کشت می شده است. در قرن هفدهم گوجه فرنگی به انگلستان و هلند راه یافت. گوجه فرنگی در حال حاضر در تمام مناطق دنیا کشت می شود و تقریبا در تمام فصول سال وجود دارد. گوجه فرنگی با نام علمی Solanum lycopersicum یکی از گیاهان متعلق به تیره سیب زمینی از دو لپه ایها می باشد.
گیاهی است علفی و دارای برگهای مرکب از برگچه های فرد نا مساوی که به حالت طبیعی و یا پس از لمس کردن بویی ناپسند و قوی از آن استشمام می شود. گلهای آن رنگ مایل به سبز دارد و به صورت منفرد یا به تعداد کم در مجاور هم ظاهر می گردد. میوه اش گوشت دار ، قرمز رنگ و به ابعاد مختلف است و پس از رسیدن رنگ قرمز زیبایی پیدا می کند.

ترکیبات شیمیایی
در تمام قسمتهای گیاه ، مقداری سولانین مخصوصا در میوه سبز و حتی در میوه ها قبل از رسیدن به تکامل وجود دارد. مقدار درصد سولانین در میوه کال بیشتر از میوه رسیده می باشد. گوجه فرنگی کاملا رسیده فاقد سولانین می باشد و به همین علت است که اگر گوجه فرنگی به حالت نارس مصرف شود ممکن است عوارض مسمومیت نظیر دل پیچه ، اسهال و باز شدن مردمک چشم ایجاد نماید. میوه گوجه فرنگی سرشار از ویتامینهاست.
خواص دارویی
* گوجه فرنگی درجه قلیایی بودن خون را بالا برده و به دفع مواد سمی خون کمک می کند بطور کلی تصفیه کننده خون است.
* به دفع اسید اوریک کمک می کند.
* گوجه فرنگی ملین است.
* برای درمان ورم ملتحمه چشم مفید است.
* سنگ کلیه را دفع می کند.
* آقایان با خوردن مرتب گوجه فرنگی می توانند خود را در مقابل سرطان پروستات بیمه کنند.
* گوجه فرنگی از ورم آپاندیس جلوگیری می کند.

* برای رفع دندان درد ، ریشه و شاخه برگهای گوجه فرنگی را با آب بجوشانید و این جوشانده را مزمزه کنید.
* از جوشانده برگ گوجه فرنگی برای دفع شته و حشرات می توانید استفاده کنید. بدین منظور باید یک کیلو گرم برگ تازه گوجه فرنگی را در یک لیتر سرکه خیس کرده و در داخل ظرفی که 2 لیتر آب جوش دارد بریزید و ظرف را روی چراغ قرار داده و به مدت 15 دقیقه بجوشانید ظرف را از روی چراغ برداشته بگذارید تا مدت دو روز بماند و گاهگاهی آنرا هم بزنید سپس آنرا با فشار صاف کنید.
* گوجه فرنگی برای مبتلایان به نقرس و رماتیسم مفید است.
* گوجه فرنگی ورم مفاصل را برطرف می کند.
* از تصلب شرائین جلوگیری می کند و حتی مصرف آن برای این مرض مفید است.
* اوره خون را پائین می آورد.
* ورم مخاط روده را رفع می کند.
* برای تمیز کردن خون باید از آب گوجه فرنگی و کرفس به نسبت مساوی و به مقدار سه فنجان در روز قبل از غذا و به مدت سه هفته استفاده کنید .
* اگر پوست شما کک و مک دارد هر روز آنرا با گوجه فرنگی تمیز کنید کم کم کک و مکها را از بین می برد.
گوجه فرنگی از هزاران سال پیش وجود داشته است ولی البته باندازه یک گیلاس بوده است و کم کم در اثر پرورش درشت تر شده است .
وطن اصلی این گیاه آمریکای جنوبی است . درقرن شانزدهم در کشور پرو به مقدر زیاد کشت می شده است . در قرن هفدهم گوجه فرنگی به انگلستان و هلند راه یافت و چون بسیار گران بود فقط مردم ثروتمند می توانستند از آن استفاده کنند و بنام سیب عشق معروف شد .
گوجه فرنگی در حال حاضر در تمام مناطق دنیا کشت می شود و تقریبا در تمام فصول سال وجود دارد گوجه فرنگی انواع مختلف درد و در حدود شانزده نوع آن در بازار بفروش می رسد .

یک نوع آن گوجه فرنگی سفید است که دارای اسید نمی باشد
گوجه فرنگی را باید هنگامیکه کاملا رسیده استداز بوته چید و مصرف کرد زیرا گوجه فرنگی نارس و سبز است و برای بدن مخصوصا کلیه ها مضر است البته در کشورهای صنعتی گوجه فرنگی را کال می چینند تا هنگامیکه به مقصد می رسد و یا در انبار می رسد و قرمز می شود . اگر گوجه فرنگی کاملا قرمز باشد ولی هنگامیکه آنرا باز می کنند تخم آن سبز باشد نشانه این است که گوجه فرنگی را کال چیده اند و بعدا رسیده است .گوجه فرنگی گیاهی است یکساله دارای شاخه های زیاد که ارتفاع آن تا حدود یک متر می رسد
گلهای آن زرد رنگ است که از کنار شاخه ها و یا ساقه آن بیرون می آید . مویه آن گرد و یا تخم مرغی و برنگ زرد و یا قرمز دیده می شود .
ترکیبات شیمیایی:
گوجه فرنگی از هزاران سال پیش وجود داشته است ولی البته باندازه یک گیلاس بوده است و کم کم در اثر پرورش درشت تر شده است .
وطن اصلی این گیاه آمریکای جنوبی است . درقرن شانزدهم در کشور پرو به مقدر زیاد کشت می شده است . در قرن هفدهم گوجه فرنگی به انگلستان و هلند راه یافت و چون بسیار گران بود فقط مردم ثروتمند می توانستند از آن استفاده کنند و بنام سیب عشق معروف شد .
گوجه فرنگی در حال حاضر در تمام مناطق دنیا کشت می شود و تقریبا در تمام فصول سال وجود دارد گوجه فرنگی انواع مختلف درد و در حدود شانزده نوع آن در بازار بفروش می رسد .
یک نوع آن گوجه فرنگی سفید است که دارای اسید نمی باشد
گوجه فرنگی را باید هنگامیکه کاملا رسیده استداز بوته چید و مصرف کرد زیرا گوجه فرنگی نارس و سبز است و برای بدن مخصوصا کلیه ها مضر است البته در کشورهای صنعتی گوجه فرنگی را کال می چینند تا هنگامیکه به مقصد می رسد و یا در انبار می رسد و قرمز می شود . اگر گوجه فرنگی کاملا قرمز باشد ولی هنگامیکه آنرا باز می کنند تخم آن سبز باشد نشانه این است که گوجه فرنگی را کال چیده اند و بعدا رسیده است .گوجه فرنگی گیاهی است یکساله دارای شاخه های زیاد که ارتفاع آن تا حدود یک متر می رسد
گلهای آن زرد رنگ است که از کنار شاخه ها و یا ساقه آن بیرون می آید . مویه آن گرد و یا تخم مرغی و برنگ زرد و یا قرمز دیده می شود .
خواص داروئی:
گوجه فرنگی گر چه دارای اسید سیتریک است اما بدن را قلیایی می کند
1)گوجه فرنگی درجه قلیایی بودن خون را بالا برده و به دفع مواد سمی خون کمک می کند بطور کلی تصفیه کننده خون است
2)به دفع ساید اوریک کمک می کند
3)گوجه فرنگی ملین است
4)برای درمان ورم ملتحمه چشم مفید است
5)سنگ کلیه را دفع می کند
6)آقایان با خوردن مرتب گوجه فرنگی می توانند خود را در مقابل سرطان پروستات بیمه کنند
7)گوجه فرنگی از ورم آپاندیس جلوگیری می کند
8)برای رفع دندان درد ، ریشه و شاخه برگهای گوجه فرنگی را با آب بجوشانید و این جوشانده را مضمضه کنید .
9)از جوشانده برگ گوجه فرنگی برای دفع شته و حشرات می توانید استفاده کنید . بدین منظور باید یک کیلو گرم برگ تازه گوجه فرنگی را در یک لیتر سرکه خیس کرده و در داخل ظرفی که 2 لیتر آب جوش درد بریزید و ظرف را روی چراغ قرار داده وبمدت 15 دقیقه بجوشانید ظرف را از روی چراغ برداشته بگذارید تا مدت دو روز بماند و گاهگاهی آنرا هم بزندی سپس آنرا با فشار صاف کنید
10)گوجه فرنگی برای مبتلایان به نقرس و رماتیسم مفید است
11)گوجه فرنگی ورم مفاصل را برطرف می کند
12)از تصلب شرائین جلوگیری می کند و حتی مصرف آن برای این مرض مفید است
13)اوره خون را پائین می آورد
14)ورم مخاط روده را رفع می کند
15)برای تمیز کردن خون باید از آّ گوجه فرنگی و کرفس به نسبت مساوی و بمقدر سه فنجان در روز قبل از غذا و بمدت سه هفته استفاده کنید .
16)برای تمیز کردن لکه جوهر بر روی لباس یک تکه پنبه را در داخل آب گوجه فرنگی برده و لکه جوهر را با آن مالش دهید و سپس آنرا بشوئید
17)اگر پوست شما کک و مک درد هر روز آنرا با ّآ گوجه فرنگی تمیز کنید کم کم کک و مکک ها را از بین می برد
مضرات :
در بعضی از اشخاص هضم گوجه فرنگی با اشکال صورت می گیرد آنهائیکه معده حساس دارند نباید درخوردن گوجه فرنگی افراط کنند .
بعضی از افراد نسبت به گوجه فرنگی حساسیت دارند اینگونه افراد نیز نباید گوجه فرنگی بخورند
گوجه فرنگی
نحوه استفاده : به شیوه های مختلف در غذا مصرف میشود
خواص : گوجه فرنگی Tomato
نام علمی Lycopersicum esculentum
کلیات گیاه شناسی
گوجه فرنگی از هزاران سال پیش وجود داشته است ولی البته باندازه یک گیلاس بوده است و کم کم در اثر پرورش درشت تر شده است .
وطن اصلی این گیاه از آمریکای جنوبی است . درقرن شانزدهم در کشور پرو به مقدر زیاد کشت می شده است . در قرن هفدهم گوجه فرنگی به انگلستان و هلند راه یافت و چون بسیار گران بود فقط مردم ثروتمند می توانستند از آن استفاده کنند و بنام سیب عشق معروف شد .
گوجه فرنگی در حال حاضر در تمام مناطق دنیا کشت می شود و تقریبا در تمام فصول سال وجود دارد گوجه فرنگی انواع مختلف دارد و در حدود شانزده نوع آن در بازار بفروش می رسد .
یک نوع آن گوجه فرنگی سفید است که دارای اسید نمی باشد
گوجه فرنگی را باید هنگامیکه کاملا رسیده است از بوته چید و مصرف کرد زیرا گوجه فرنگی نارس و سبز است و برای بدن مخصوصا کلیه ها مضر است البته در کشورهای صنعتی گوجه فرنگی را کال می چینند تا هنگامیکه به مقصد می رسد و یا در انبار می رسد و قرمز می شود . اگر گوجه فرنگی کاملا قرمز باشد ولی هنگامیکه آنرا باز می کنند تخم آن سبز باشد نشانه این است که گوجه فرنگی را کال چیده اند و بعدا رسیده است .
گوجه فرنگی گیاهی است یکساله دارای شاخه های زیاد که ارتفاع آن تا حدود یک متر می رسد
گلهای آن زرد رنگ است که از کنار شاخه ها و یا ساقه آن بیرون می آید . مویه آن گرد و یا تخم مرغی و برنگ زرد و یا قرمز دیده می شود .
خواص داروئی:
گوجه فرنگی گر چه دارای اسید سیتریک است اما بدن را قلیایی می کند
1)گوجه فرنگی درجه قلیایی بودن خون را بالا برده و به دفع مواد سمی خون کمک می کند بطور کلی تصفیه کننده خون است
2)به دفع ساید اوریک کمک می کند
3)گوجه فرنگی ملین است
4)برای درمان ورم ملتحمه چشم مفید است
5)سنگ کلیه را دفع می کند
6)آقایان با خوردن مرتب گوجه فرنگی می توانند خود را در مقابل سرطان پروستات بیمه کنند
7)گوجه فرنگی از ورم آپاندیس جلوگیری می کند
8)برای رفع دندان درد ، ریشه و شاخه برگهای گوجه فرنگی را با آب بجوشانید و این جوشانده را مضمضه کنید .
9)از جوشانده برگ گوجه فرنگی برای دفع شته و حشرات می توانید استفاده کنید . بدین منظور باید یک کیلو گرم برگ تازه گوجه فرنگی را در یک لیتر سرکه خیس کرده و در داخل ظرفی که 2 لیتر آب جوش دارد بریزید و ظرف را روی چراغ قرار داده وبمدت 15 دقیقه بجوشانید ظرف را از روی چراغ برداشته بگذارید تا مدت دو روز بماند و گاهگاهی آنرا هم بزندید سپس آنرا با فشار صاف کنید
10)گوجه فرنگی برای مبتلایان به نقرس و رماتیسم مفید است
11)گوجه فرنگی ورم مفاصل را برطرف می کند
12)از تصلب شرائین جلوگیری می کند و حتی مصرف آن برای این مرض مفید است
13)اوره خون را پائین می آورد
14)ورم مخاط روده را رفع می کند
15)برای تمیز کردن خون باید ازآب گوجه فرنگی و کرفس به نسبت مساوی و بمقدر سه فنجان در روز قبل از غذا و بمدت سه هفته استفاده کنید .
16)برای تمیز کردن لکه جوهر بر روی لباس یک تکه پنبه را در داخل آب گوجه فرنگی برده و لکه جوهر را با آن مالش دهید و سپس آنرا بشوئید
17)اگر پوست شما کک و مک درد هر روز آنرا با آب گوجه فرنگی تمیز کنید کم کم کک و مک ها را از بین می برد
تاریخ شروع 7/12/85 با اتوکلاو خاک و کشت گوجه فرنگی در گلخانه

12/85/12 ساخت محیط کشت نیمه تعریف شده با دز موادی که در جدول ذکر شده با کمک ترازوی دقیق میکرو پیپت ، شیکر تک لوله و …………………………
ترکیب یک محیط کشت مایع نیمه تعریف شده برای تولید انبوه اسپور؛
نام ماده
مقدار در لیتر

2 گرم

4/0 گرم

3/0 گرم

37 میلی گرم

50 میلی گرم

16 میلی گرم

14 میلی گرم
Thiamine , riboflavin , pantothenate , niacin ,pyridoxamine , thiotic acid.
از هر یک 500 میکرو گرم
Folic acid , biotin , vitamin B
از هر یک 50 میکروگرم
Glucose
 منبع کربن
Casamino acids
 منبع نیتروژن

مقدار کربن و نیتروژن بسته به قارچ و رژیم غذایی مورد نظر محاسبه می شود

C:N ratio Casamino acid gl-1 Glucose 20%(W/V)mll-1
40:1 0.6 46
15:1 1.8 39
5:1 4.96 17.5

. …..
در مرحلهء اول آزمایش هدف مشاهدهء میزان اسپورزایی دو ایزوله در محیط های متفاوت است پس بعد از ساخت این محیط های با کمک دستگاهpH کشت
pH مخصوص اینکار تعیین
می کنیم و روی ظرف یادداشت می کنیم
21/12/85 جمع آوری ظروف پتری دیش و اتوکلاوآنها

همین طور اتوکلاو خاک
در تاریخ 22/12/85 شرو ع مرحلهء 1 آزمایش با کشت دان دو ایزولهء قارچ که با دو کد 6 و 2 نام گذاری شدند
تیمارها (5، 5/5 ،6 ،5/6 ،15/7) پس 5 تیمار داریم و برای هر تیمار 4 تکرار pH
چون دو ایزوله داریم در مجموع 40 پتری دیش در آزمایش پر می شود
یعنی 40 کرت، با شروع آزمایش، خطای دید موجب شد یکی از پتری دیشها
اشتباه شده و حذف شود .بنابراین ما یک کرت از دست رفته داریم که باید به روشی دیگر برآورد شود.
ایزولهء اشتباه شده از 5/6 ایزولهء 2 حذف شد
پس 39 کرت در جای خودشان در شیکر قرار گرفتند

23/12/85 نمونه ها باز بینی شد اسپوری تولید نشده بود
25/12/85 نمونه ها با کمک لام و لامل معمولی سنجش اسپور شد
فقط به این منظور که ببینیم آیا اسپور دهی در آنها رخ داده و حاوی اسپور شده
اند یا نه؟و نتایج به شکل جدول رسم شد
.مربوط به ایزولهء 6

5
5.5
6
6.5
7.15
1
خیلی کم
خیلی کم
0
زیاد
خیلی زیاد+
2
خیلی کم
0
متوسط
زیاد
خیلی زیاد_
3
خیلی کم
خیلی کم
متوسط
زیاد
خیلی زیاد_
4
خیلی کم
0
0
زیاد
خیلی زیاد+
مربوط به ایزولهء 2

5
5.5
6
6.5
7.15
1
0
0
0
متوسط
متوسط
2
0
0
0
متوسط
متوسط_
3
0
0
0
متوسط+
خیلی زیاد
4
0
0
0
ازدست
رفته
زیاد
های بالا فعال تر است تا پایین pH مشاهده شد اسپور زایی در هر دو ایزوله در

همین طور اسپورزایی در روز سوم در ایزولهء 6 بیشتر از 2 بوده پس سرعت بالاتری نسبت به ایزولهء 2 تا به حال داشته نحوهء تعیین میزان اسپور هر ایزوله با صفت هایی مثل؛
0-خیلی کم-کم-متوسط-زیاد-خیلی زیاد

اما شمارش اسپورموکول شد به روز یک شنبه 27/12/85 یعنی 4روز بعد از کشت با کمک همو سایتومتر که لام مدرج است
اسپورهای شمارش شده در مربع بزرگ در10000 ضرب می شوند
اسپورهای موجود در مربع های متوسط داخل مربع اصلی در 250000 ضرب
می شوند
اکثرا شمارش در مربع های خیلی کوچک مختص شمارش اسپور قارچ ها نیست بلکه اکثرا برای شمارش باکتری ها به کار میروند در صورت شمارش رقم شمرده شده در 4000000 ضرب می شود

قسمت مدرج
25/12/85 در شمارش اسپور این طور معلوم شد
تعداد اسپور ها در دو ایزوله پس از شمارش سه خانهء کوچک از هموسایتومتر و معدل گیری آنها سپس جمع اعداد بدست آمده در زیر هم در یک ستون و معدل گیری کلی تکرارها و بعد ضرب عدد نهایی در 250000 جهت محاسبهء نهایی تعداد اسپورها

در ابتدای اسپوردهی سرعت اسپوردهی در ایزولهء 6 بیشتر از ایزولهء 2 بود اما با گذشت زمان کارایی ایزولهء 2 نیز در اسپور دهی بالا رفت سرعت اسپوردهی هر دو ایزوله درHPهای بالا بیشتر از پایین است و آزمایش نشان داد اسپور دهی دو ایزوله در HP بالا کار آمدتراست
تاریخ کشت ایزوله ها 22/12/85 بود و تاریخ شمارش 28/12/85 (تعداد اسپوردر میلی متر)
مرحلهء دوم آزمایش در تاریخ 29/12/85 با ساخت محیط کشت 15:1 شبیه محیط قبلی شروع شد

این بار محیط کشت علاوه بر مواد قبلی درصدی هم در هر تیمار گلیسرول داشت درصد گلیسرول که تیمار ما در نظر گرفته شد به ترتیب 0%و2%و5%و7% بودکه در ساخت محیط کشت با در نظر گرفتن این مطلب که در آزمایش قبل بهترین پ هاش برای اسپورزایی دو ایزوله 7.15 بود بنابراین در این آزمایش هم پ هاش محیط ثابت در هر تیمار 7 در نظر گرفته شد پس از ساخت محیط های کشت در پتری دیش در بسته اتوکلاو شد و آمادهء انتقال به ظرفهای پتری دیش و کشت دادن قارچ در آنها شد
در تاریخ1/1/86 به اندازهء 50 میلی از هر محیط کشت داخل یک پتری دیش ریخته شد اطلاعات به این شکل روی هر پتری دیش ثبت شد که ایزولهء فرضا 2 گلیسرول 0% و تاریخ کشت آن ایزوله برای هر درصد ایزوله 4 تکرار در نظر گرفته شد 4تکرار و 4 درصد از ایزوله پس رویهم برای هر ایزوله 16 کرت یا پتری دیش و برای دوتای آنها 32 پتری دیش اتوکلاو و از محیط کشت مورد نظر پر شد در همین تاریخ 1/1/86 پس از فیلتر کردن و استخراج اسپورها از محیط کشت قبلی دو ایزوله در پ هاش های 7.15
با انجام محاسباتی که فرمول آنها ذکر می شود سنجیده شد که اسپور فیلتر شده که غلظتش در زیر همو سایتومتر بررسی شد چه مقدار به محیط ما افزوده شود تا کشت صحیح انجام شود

پس از محاسبه در تاریخ یکم کشت ایزولهء 2 و در تاریخ 2/1/86 کشت ایزولهء 6 انجام گرفت سپس در شیکر قرار گرفت تا در تاریخ 5/1/86 دوباره هر محیط اسپور شماری شود.

پس از شمارش اسپورهای هر تکرار ایزوله
شواهد حاکی از این مطلب است که هر دو ایزوله در درصد گلیسرول های 2و 5 کارایی بالاتری نسبت به سایر درصدها داشته و اسپورزایی بیشتری خواهند داشت
11/1/86 روز شنبه پس از شستن ظروف به جا مانده از روز قبل
های محیط کشت(15:1) با pH
ساخته شد.6/5,7,7/5,8
برای هر تیمار 4 تکرار در نظر گرفته انتخاب این 4 پ هاش با توجه به نتایج حاصل از آزمایشات قبل بود.
12/1/86 یک شنبه
در32 پتری دیش برای دو ایزوله از محیط کشت ریخته شد سپس کشت دادن دو ایزوله ء قارچ

در آنها صورت گرفت با بهره گیری از سوسپانسیون دو ایزوله که از قبل تهیه کرده بودیم و فیلتر کردن آنها جهت حذف میسلیوم های قارچ( چراکه دو سوسپانسیون ایزوله مدتی ثابت بیرون از شیکر مانده بودند پس میسلیوم دار شده بودند)اسپور قارچ گرفته و به مقدار به کار گرفته شده در آزمایش قبلی یعنی برای ایزولهء2 _225 میکرولیتر و برای ایزولهء 6 _ 44 میکرولیتر با کمک میکرو پیپت در هر پتری دیش حاوی محیط کشت ریختیم.پس از انجام عمل کشت هر 32 پتری دیش برای اسپورزایی روی شیکر قرار گرفت.

(اسپور گیری باید از اسپورهای جدید حاصل از آزمایش محیط کشت حاوی گلیسرول انجام می شد اما به علت بی دقتی ایزولهء 6 از بین رفت بنابراین ایزولهء 2 هم کنار گذاشته شد و از اسپورهای آزمایش قبل با فیلتر مجدد استفاده شد).

در تاریخ 15/1/86 شمارش اسپور با کمک همو سایتومتر انجام شد که جواب بسیار نا امید کننده بود تعداد اسپورها در هر دو ایزوله به قدری کم بود که قابل ذکر نبود بنابراین دوباره پتری دیش ها روی شیکر قرار گرفت (علت این کمی اسپور دهی و سرعت بسیار کم اسپور دهی دمای پایین آزنایشگاه در این تارخ فرض شد)در همین تاریخ در 17 گلدان حسن یوسف درخاک های استریل کاشته و آبیاری شد .

در تاریخ 17/1/86 روز جمعه کشت15 گلدان دیگر حسن یوسف و واکاری گلدانهای حسن یوسف و نشاء 4 عدد از گیاهچه های 4 برگی شدهء گوجه فرنگی انجام شد

روز یکشنبه 19/1/86 بذر گل جالیز در کنار ریشهء گیاهچه های گوجه فرنگی و حسن یوسف ریخته شد.سپس شمارش اسپور با کمک هموسایتومتر انجام گرفت
نتیجهء این آزمایش نشان داد هر دو ایزوله در پ هاشهای بالا 7.5 و 8 اسپوردهی کمتری 25/1/86 شنبه تهیهء بذور با ارزش در کشور، نیز تهیهء خاک استریل ،
26/1/86ساخت محیط 15:1 با بهره گری از نتایج مراحل قبلی آزمایش به این
ترتیب::
1.بهترین درصد گلیسرول محاسبه شده یعنب 2درصد و 5 درصد مدنظر قرار
گرفت
2. همچنین بهترین پ هاش محاسبه شده برای هر دو ایزوله 6.5 قرار داده شد
درنتیجه محیط کشت ای شبیه محیط کشت های قبلی با نسبت کربن به نیتروژن 15:1 ساخته شد با این تفاوت که پ هاش همه را در 6.5 تنظیم و گلیسرول را در یک سری از فلاسک ها 0 در نظر گرفتیم یعنی تیمار شاهد و در یک سری 5 درصد.5 درصد گلیسرول به معنی نسبت 5 به 1 یعنی اگر 1 لیتر برای هر ایزوله محیط کشت ساخته شد محیط کشتی که قرار بود 5 درصد گلیسرول داشته باشد می بایسن با گرفتن یک تناسب 50000ماکرو لیتر با میکروپیپت به آن
گلیسرول اضافه می کردیم یعنی به اندازهء 5 درصد یک لیتر.
قرار بود آزمایش با دو تیمار ذکر شده با ده تکرار انجام شود اما شیکر پر بود بنابراین ادامهء کار به تعویق افتاد پس بنا شد تا زمان خالی شدن شیکر محیط کشت دیگری به نام محیط کشت ریچارد ساخته شود که در نتیجه مراحل
آزمایش تغییر یافت
دوشنبه 27/1/86 در ادامهء کار ساخت محیط کشت ریچارد که محیط کشت
ارزانتری است انجام شدو پس از اتوکلاو شدن نگه داشته شد.
در محیط کشت فقیرتر طبق بیانات استاد اسپورزایی بیشتر است بنابراین این مرحله از آزمایش را جهت مقایسهء دو محیط کشت در حین انجام آزمایش تحمل به خشکی دو ایزوله انجام می دهیم.درکشت دو ایزوله در دو محیط کشت یکی حاوی محیط نیمه تعریف شده 15:1 و دیگری در محیط کشت ریچارد یک نتیجهء مهم اقتصادی نیز خواهد داشت.چنانکه خواهیم دانست که آیا اسپورزایی در هر دو محیط کشت به یک حد است یا خیر اگر اسپورزایی در هر دو محیط به یک میزان بود به صرفه است در تولید بالای میکوهربیساید از محلول ریچارد که نتیجهء خوبی هم دارد و به صرفه تر است بهره بگیریم تا در مقیاس بزرگتر تولید
به صرفه تری داشته باشیم.
ترکیبات محیط کشت محلول ریچارد
فرمول مادهء شیمیایی
مقدار دریک لیتر
نیترات پتاسیم
10 گرم
دی هیدروژن پتاسیم
5 گرم
سولفات مگنزیوم
2.5 گرم
کلرور آهن
20 میلی گرم
دی- گلوکز
50 گرم

فرمول ترکیبات محلول ریچارد که به جز مواد و مقدار ترکیباتش در طرز ساخت شبیه همان محیط کشت 15:1 است به این ترتیب که مواد و ترکیبات راکه برای
دو لیتر محاسبه کردیم
به همان شکل با ترازوی دقیق برقی وزن کرده سپس در دو لیتر آب مقطر با گذاشتن بر روی دستگاه گرم کن چرخان (مغناطیسی به کمک مگنتیت) حل می کنیم همچنین یک لیتر محلول با گلیسرول 5 درصد و لیتر دیگر 0 درصد درست شد مثل محیط نیمه تعریف شده سپس به کمک پ هاش سنج دقیقا مثل مراحل قبل پ هاش را اندازه گیری کرده و با کمک یا اسید هیدروکلرید ریک یا به کمک سود یا همان هیدروکسید سدیم پ هاش مد نظر را ایجاد میکنیم که در این مرحله پ هاش مدنظر ما 6.5 بود(باید ذکر کرد قبل از تغییر پ هاش ها اکثر محیط های کشت پ هاشی اسیدی و نزدیک به 5 یا 5.5 دارند پس بیشترین استفاده از همان محلول سود است که 1 درصد بوده و با ترکیب 4 گرم سدیم در 100 میلی لیتر
آب تهیه می شود)
در این حالت با داشتن دو نوع محیط کشت با دو نوع درصد گلیسرول 4 تیمار داریم و برای هر تیمار هم 4 تکرار در نظر میگیریم که در نتیجه برای هر ایزوله 16 فلاسک و برای دوتا 32 فلاسک استریل لازم است .و برای افزودن اسپور قارچ هم با فیلتر کردن از اسپور قارچ مرحلهء قبل اسپور برداشت میکنیم فیلتر کردن با کمک دستمال فیلتر و قیف که هر دو از قبل استریل شده اند انجام می گیرد که پس از فیلتر کردن یک قطره روی هموسایتومتر گذاشته شده غلظت اسپورش در زیر میکروسکوپ سنجیده شده و پس از محاسبه برای کشت در هر فلاسک غلظتش تعیین میشود غلظت ای است که ما مدنظر داریم که اسپور در هر فلاسک بریزیم پس به اضافه می کنیم همان نسبت بسته به میزان اسپور از
هر ایزوله به میزان.
c1v1=c2v2 فلاسک ها اسپور اضافه میکنیم با فرمول
27/1/86 دوشنبه جهت انجام مرحلهء تعیین دامنهء میزبانی شروع به آماده کردن
گلدان ها و خاک برای کشت کردیم
در این تاریخ گلدانهای یک کیلویی که تعداد آنها160 عدد بود در وایتکس ضد
عفونی و سپس خشک شد.

گلدان های خشک شده از خاک استریل تهیه شده پر شد سپس روی هر گدان نام گیاهی که قرار بود در آن کشت شود با ذکر شمارهء تکرار یادداشت و چسبانده شد در کنار هر گیاه با 5 تکرار برای اسپورپاشی قارچ 5 تکرار هم از شاهد قرار
داده شد که قرار است به همان اندازه و در همان زمان آب پاشی شوند.

لیست گیاهانی که کشت شدند به شرح زیر بود:
به تعداد 16 گیاه و هر کدام با روش خاصی مثلا تک لپه ای ها اول به مدت دو روز خیسانده شدند بذور دو لپه هم کشت شدند در هر گلدان 5 تا 6 بذر از بذر های درشت تر قرار داده شد و به اندازهء یک بند انگشت یا دو برابر قطر خود
بذر در خاک فرو داده شد.
برخی از بذور مثل پنبه پرز گیری شد به کمک اسید سولفوریک 1 درصد سپس کشت شد به سبب از بین بردن خواب بذر و پوشش آن برای افزایش سرعت جوانه زنی.برخی بذور خیلی ریز مثل تنباکو روی سطح خاک پاشیده شد و
دوباره روی سطح آن با خاک پوشانده شد .
آبیاری این بذور با آبپاش مخصوص که مانع به هم خوردن بذرها در خاک و
جابه جایی آنها می شود انجام می گیرد.
نام رقم کشت شده
نام علمی گیاه
نام گیاه به انگلیسی
نام گیاه به فارسی
گل آذین
Helianthus annuus L.
Sun flower
آفتابگردان
بومی اصفهان پاکان بذر
Carthamus tinctorius L.
safflower
گلرنگ
گرگان
Glycine max Merrill
Soy bean
سویا
موسسهء چغندر فریمان
Beta vulgaris saccharifera L.
Sugar beet
چغندر قند
الوند
Triticum aestivum L.
wheat
گندم نان
N.rastica
Nicotiana persica
tobacco
تنباکو
Ps
Cucumis sattivus
cucumber
خیار
Ps
Lycopercicom esculentum
tomato
گوجه فرنگی
Singlecross704
Zea mays L.
corn
ذرت
کرمانشاه
Cicer arietinum L.
pea
نخودزراعی
پاکان بذر
Onobrychis sativa
spers
اسپرس زراعتی
کارون و کویر
Hordeum vulgare L.
barley
جو
P.vulgaris
Phaseolus calcaratus
Kidney bean
لوبیا قرمز
پاکان بذر
Brassica napus L.
Rape seed
کلزا
ورامین
Gossypium hirsutum L.
cotton
پنبه فاریاب
نیک شهری
Medicago sativa L.
alfalfa
یونجه

سه شنبه 28/1/86 آماده کردن و پر کردن یک سری دیگر از گلدانها و پر کردن
از خاک برای نشاء گوجه فرنگی ها همراه گل جالیز
29/1/86 آب دادن گلدان ها
1/2/86 شنبه کاشت گلدانها و آب دادن
دوشنبه 3/2/86 کاشت نشاء های گوجه فرنگی که ریشهء آنها به گل جالیز آغشته
شده
پنج شنبه 6/2/86 پر کردن فلاسک ها از محیط کشت های استریل نیمه تعریف شده و ریچارد با نسبتهای گلیسرول 0 و 5 درصد با پ هاش معین 6.5 در همهء فلاسک ها با تکرار 4 برای هر تیمار سپس کشت دو ایزوله در دو نوع محیط
4 تیمار در 4 تکرار 16 فلاسک برای هر ایزوله و برای دو ایزوله 32 فلاسک

مراحل کشت دو ایزوله :
تهیهء سوسپانسیون از هر ایزوله شمارش اسپورهای ایزوله های فیلتر شده جهت تعیین غلظت در فلاسکها پس از شمارش اسپور اسپورآنهاو
رساندن میانگین اسپورها بود که در فرمول گذاشته شد
برای هر فلاسک80 ماکرولیتر از سوسپانسیون ریخته می شود با دقت و در محیط استریل زیر هود پس از تهیهء سوسپانسیون دو ایزوله با در نظر گرفتن حجمهای صحیح از هر ایزوله کشت در هر فلاسک که حاوی 100 میلی لیتر
محیط کشت است انجام شد
(در فلاسکها هم از محیط نیمه تعریف شده وهم از محیط کشت ریچارد به
اندازهء 100 میلی لیتر ریخته شد)
فلاسکها پس از کشت روی شیکر قرار گرفت در تاریخ 6/2/86
در همین تاریخ 6/2/86 به گلدانها آب داده شد مشاهده شد بیشتر گیاهان چه تک لپه ای ها و چه دولپه ایها 3 تا 4 برگه شده بودند تک لپه ایها با سرعت بیشتری نسبت به دولپه ایها جوانه زدند و رشد کردند (قوهء نامیهء بیشتر بذور 94 درصد
بوده)
با توجه به اینکه بذر هر گیاهی پ هاش خاص خود و دمای پایهء رشد خاص خود را دارد و اگر دمای بیشتری را دریافت کند به سرعت رشد می کند پس سریعترجوانه زده و رشد می کندبنابراین نمی توان برداشت خاصی راجع به سرعت دقیق هر گیاه در جوانه زنی داشت .(بذرغلات با سرعت بیشتری نسبت به
دولپه ایها جوانه می زنند) .ادامهء نشاء گوجه فرنگی.

شنبه 8/2/86 شمارش اسپور انجام نشد فقط فلاسک ها تکان داده شد و سپس طبق مشاهدات ظاهری یادداشت شد که اسپوردهی در محیط نیمه تعریف شده
سریعتر آغاز شده.
در همین روز کود کریستالهء سبز رنگ که به کود کامل مصطلح است با برآوردی صحیح به شکل محلول با اسپری روی خاک گلدانهایی که حداقل 4 برگ
کامل داشتند پاشیده شد.
این کار به دو علت انجام گرفت 1. پس از اینکه پ هاش خاک گلدانها اندازه گیری شد مشاهده شد که پ هاش آنها بالاتر از 8.5 است که نشان می دهد پ هاش بالا است که مانع جذب بسیاری از مواد معدنی و یونها من جمله یون آهن و…. از خاک توسط گیاهان می شود بنا براین کود کریستالهء سبز که پ هاش ذکر شده روی آن 6.5 تا 7 ذکر شده و فرمولی 18-18-18+میکرو از عناصر اصلی فسفر پتاس و نیتروژن دارد می تواند پ هاش خاک را کم کند و نیز در عین کاستن پ
هاش مواد غذایی لازم را هم به خاک بیا فزاید.

محاسبه میزان کود مجاز برای افزودن به خاک گلدانها با گرفتن تناسب تعیین شد به این شکل که برای یک هکتار زمین میزان 4 کیلو از کود که در برشور شرکت سازنده ذکر شده بود لازم بود پس با محاسبهء مساحت گلدان و گرفتن تناسب تعیین شد که در هر لیتر آب 7/0 گرم کود اضافه شود و پس از اینکه به حالت محلول درآمد به هر گلدان به اندازهء 10 میلی لیتر از کود اضافه گردد اینکار هر
15 روز یکبار انجام می شود.
که این کود اثر مثبتی نداش که هیچ باعث سوختن 4 نوع تیمار ما شد ازجمله
خیار، کلزا ،آفتابگردان ،تا حدودی لوبیا…
یک شنبه 9/2/86 شمارش اسپورها در دو محیط کشت و مقایسهء آنها انجام شد سپس گلدانها آب داده شد نشاء های تیمارهای از بین رفته باز سازی شد
نتایج نشان داده که تاکنون محیط کشت نیمه تعریف شده کارآمد تر بوده نسبت
به محیط ریچارد

در همین روز یعنی 9/2/86صفحات نیمه تراوا که جنسی شیشهای شکل و بی رنگ داشتند در بشری ریخته شد و با آب جوش و آب گرم به خوبی شسته شد سپس تا سر بشر تا جایی که کاملا روی صفحات نیمه تراوا را بگیرد آب پر شد
و در آن با آلومینیوم پوشانده و اتو کلاو شد.

سپس در روز دوشنبه 10/2/86 پس از استریل شدن این صفحات آنها را جهت خشک شدن و نیز صاف شدن بین کاغذهای سفید آ 4 گذاشته و روی آنها را کتابهای سنگین می گذاریم تاصا ف شود پس از خشک شدن این صفحات توسط پانچی سوراخ شده هدف از سوراخ کردن این صفحات تولید دیسکت های نیمه تراوا برای جذب مواد غذایی از محیط جامد برای قارچی است که رویش قرار
می دهیم.

درهمین روز 4 گلدان گوجه فرنگی حاوی گل جالیز انتخاب شد دو تا به عنوان شاهد و دو تا جهت آلوده شدن با ایزولهء 6( با پ هاش 6.5 و گلیسرول 5% که از قبل با فیلتر کردن و تهیهء سوسپانسیون آن در دسترس داشتیم) انتخاب شد یکی از گلدانها به روش استم پانچر با 2تا 3 میکرولیتر از اسپورهای ذکر شده آلوده
شد
روش استم پانچر با خراش گوشهء کوچکی از گیاه مدنظر و آلوده کردن همان قسمت به قارچ مورد نظر انجام شد شاهد این آزما یش هم به طرز مشابهی خراش داده شد اما با آب خالی آلوده شد.گلدانی دیگر هم که در آن 4 بوتهء گوجه فرنگی بود در پای هر بوته به اندازهء 2 میلی لیتر از همین اسپورها ریخته شد و در گلدان شاهد مربوط به آن همین مقدار یعنی 2 میلی لیتر آب پای هر بوته ریخته شد.هدف>>تعیین دامنهء میزبانی قارچ بود که ببینیم برای گوجه
فرنگی خطر زا بوده یا نه>؟

ساخت محیط کشت پ د آ (جامد) در همین تاریخ به این ترتیب که 39 گرم از ترکیب پ د آ را در یک لیتر آب مقطر ریخته و روی گرم کن چرخان مغناطیسی قرار می دهیم نیم ساعت صبر می کنیم تا به خوبی حل و شفاف شود سپس در ظروف 250 میلی لیتری ریخته و آن را اتوکلاو می کنیم پس از اتوکلاو این محیط کشت آن را در ظروف پتری کوچک میریزیم و در جایی مناسب قرار میدهیم.
این محیط کشت مثل آگار پس از چند ساعت خنک شدن می بندد این محیط کشت حاوی آگار و مواد قندی است که در اکثر کشت های آزما یشگاهی کاربرد دارد
پس از ریختن این محیط کشت در ظروف پتری دیش در محیط استریل زیر هود و خنک شدن آنها در آنها گذاشته می شود و برای نگه داری ظرفها را روی هم چیده برعکس رویهم می گذاریم تا بخاری اگر به سمت بالای ظرف برگشت
مشکلی پیش نیاید.

و اما هدف از ساخت دیسکت های نیمه تراوا که توضیح داده شد چیست؟
این است که پس از گذاشتن 2تا 3 ماکرولیتر از ایزوله یا ایزوله های مدنظر آنها را در کلرات کلسیم که جاذب رطوبت است قرار می دهیم تا رطوبت را در حد 15 درصد که خشکی بیان می شود نگه دارد سپس میزان جوانه زنی و نیز طول لولهء تندشی را در آنها بررسی میکنیم با این عمل قرار است در طول زمان پی ببریم خشکی در مدتهای مختلف چه تاثیری بر روی میزان جوانه زنی اسپورهای هر ایزوله دارد و آیا خاصیت بیماری زایی آن را کم می کند یا نه؟؟ و نیز آیا همهء اسپورها جوانه میزنند و یا فقط قارچ مد نظر در حد تولید اسپور مفید است که کارایی ندارد چراکه جوانه زنی اسپور عامل مهم در ایجاد بیماری یا بیماریزایی در قارچ است پس تنها اسپورزایی بدون جوانه زنی کارایی ندارد.و مهم تولید ایزوله ای است که بتواند علاوه بر تولید اسپور مناسب به همان اندازه اسپورهایش جوانه زنی داشته باشند و نیز طول لولهء تندشی این اسپورها هم بلند تر باشد که خاصیت بیماریزایی را تشدید می کند.و هدف ازانجام تیمارهایی بر روی ایزوله ها چون پ هاش و گلیسرول و انواعی از مواد غذایی دیگرسنجیدن بهترین شرایط برای تولید اسپور قارچ و نیز جوانه زنی آن
اسپورها با این تیمارها است.

آزمایش تحمل به خشکی هر ایزوله و مقاومت آنها با گذاشتن 2 تا3 ماکرولیتر از سوسپانسیون هر ایزوله روی کاغذهای نیمه تراوا و گذاشتن این کاغذها در
زمانهای مختلف روی محیط مناسب جوانه زنی انجام می شود

تعداد جوانه های هر اسپور و طول هرلولهء تندشی در زمان مقرر با وسایلی
خاص زیر میکروسکپ انجام می شود
در آزمایش ما علاوه بر محاسبهء مجدد میزان اسپوردهی در پ هاش 6.5 و دو میزان 0 و 5 درصد گلیسرول و نیز دو نوع محیط کشت متفاوت ریچارد و نیمه تعریف شده خواص این مواد را روی جوانه زنی و طول لوله های تندشی این
جوانه ها هم می سنجیم
عصر همین روز گل جالیز به روش استم پا نچر با 2 تا 3 ماکرولیتر از سوسپانسیون ایزولهء 6 با پ هاش 6.5 و گلیسرول 5 درصد آلوده شد و شاهد
گل جالیز کناری همان بوته در نظر گرفته شد.

دو روز بعد از تلقیح گل جالیز به روش استم پانچر گل جالز در گلدان به کلی
خشک و نابود شد
تا 10 روز گلدانهای گوجه فرنگی تلقیح شده(به دو روش ریختن 2میل زیر بوته و نیز استم پانچر) با آب(به عنوان شاهد) و اسپور های ایزولهء 6(به عنوان مادهء زمینه ای تست تیمارها یعنی توان بیماریزایی ایزولهء 6 در گوجه فرنگی) با هم مقایسه و چک شدند و شواهد حاکی از عدم تاثیر این ایزوله روی گوجه فرنگی
بود و گوجه فرنگی ها به طور معمول و خوب به رشد خود ادامه دادند

13/2/86 ریختن محیط کشت پ د آ در پتری دیش ها در محیط استریل زیر هود
با دقت زیادو شمارش اسپورها

8/2/86 آبیاری و دادن کود به گلدانها
15/2/86 درست کردن دیسکتهای نیمه تراوا به این شکل که ابتدا سوسپانسیون حاصله از هر محیط کشت را به کمک هموسایتومتر تعیین غلظت کردیم سپس به
کمک فرمول مخصوص غلظت را به
رساندیم چراکه باید با این غلظت به اندازهء 3 میکرولیتر روی دیسکت های نیمه
تراوا می ریختیم

از هر یک از تیمارها به اندازهء 40 عدد تهیه شد سپس برای زمان 0 6 عدد کنار گذاشته شد که برای کشت پس از خشک شدن در محیط کشت جامد پ د آ قرار گرفت و بقیه پس از خشک شدن در لوله های کوچک ریخته شدند سپس در لولهء بزرگتری حاوی کلرور کلیسیم که جاذب رطوبت بوده و قادر به نگه داشتن رطوبت دیسکتها در حد 15 درصد است گذاشته می شوند در لولهء بزرگتر بسته شده و در دمای انکوباتور یعنی 20 درجهء سانتی گراد گذاشته می شوند که هر هفته 6 تا از آنها در محیط پ د آ کشت شوند تا بتوان اثر تنش خشکی را در هفته های مختلف روی قدرت بیماری زایی اسپورهای ایزوله که با همان میزان جوانه
زنی و طول لوله های تندشی آنها سنجیده می شود مقایسه کرد

قرار شد برای سنجش میزان مقاومت به خشکی ایزوله ء مورد نظر این کار تا 6 هفته انجام شود هفتهء اول در تاریخ 15 /2/86 هفتهء دوم کشت تاریخ 22 /2/86 و هفتهء سوم 29 / 2/86
و هفتهء چهارم در تاریخ 5/3/86 و الی آخر….
اما ترتیب کار به این شکل است که پس از کشت کردن دیسکت های حاوی 3 میکرولیتر از سوسپانسیون رقیق شدهء اسپور ایزوله آن را جهت تغذیه و رشو جوانه زنی روی محیط کشت جامد پ د آ می گذاریم سپس 8 ساعت صبر میکنیم دقیقا بعد از 8 ساعت ماده ای به نام آنلین که موجب تثبیت و عدم رشد و جوانه زنی اسپورها و جوانهء آنها می شود روی دیسکتها دقیقا به میزان 3 تا5 میکرولیتر به شکلی که قشنک و کامل روی دیسکت را بگیرد می ریزیم سپس اقدام به شمارش جوانه ها میکنیم این بار هم کل اسپورها شمارش می شود و هم اسپور های جوانه زده البته فقط جوانه هایی شمارش می شوند که طولشان بلند
تر از قطر خود اسپور باشد
عمل شمارش اسپورها ذهنی و شمارش جوانه ها همزمان به کمک کانتر یا شمارش گر انجام می شود سپس به شکل کسری نوشته و درصد گیری می شود به کمک لنز مدرج طول جرم تویوپ یا لولهء تندشی هر جوانهء اسپور هم اندازه گیری می شود من متاسفانه اینبار این مرحله را انجام ندادم که در تکرار
این مرحله از آزمایش حتما انجام میشود.
ساعت دقیق هر بار کشت همراه تاریخ نوشته میشود در زمان شمارش هم تاریخ ذکر می شود حتما هر بار 8 ساعت بعد یک قطره آنلین روی دیسکت ها برای
توقف رشد روی آنها ریخته می شود.

دقیقا پس از کشت دیسکتها روی پ د آ آن ها را در انکوباتور می گذاریم اما پس از ریختن قطرهء آنلین برای توقف جوانه زنی دیگر پتری دیش های حاوی دیسکتها را در یخچال در دمای 0 درجهء سانتی گراد تا روز شمارش نگه میداریم تا قدرت رشد آن را تا حد ممکن کم کنیم خود لولهء اصلی که حاوی دیسکت ها و جاذب رطوبت است هم که در انکوباتور تمام مدت نگه داری می
شود.
یک ساعت تاخیر در ریختن قطرهء متوقف کنندهء جوانه زنی در جواب آزمایش تغییرات زیاد و چشمگیری ایجاد می کندکشیدن از محلول آنلین آبی رنگ و ریختن روی دیسکت ها باید به دقت و به کمک میکرو پیپت و کاملا از سطح محلول انجام شود چراکه غلظت محلول در ته ظرف خیلی بالاست و به ایزولهء
کشت شده صدمه میزند
.
شاید بتوان گفت تا حد بسیار ناچیزی اسپورهای ایجاد شده در محط نیمه تعریف شده بهتر از ریچارد توان بیماریزایی خود را پس از یک هفته دورهء خشکی حفظ
کرده اند.
24/2/86 در همین تاریخ به گلدانها کود مایع به نسبت 5 در هزار محلول پاشی
شد.
وضعیت گیاهان بد نبود.

چند نوبت کود مایع با دز 5 در هزار به گلدانها اضافه شد
کود مایع زربار با فرمول:
حاوی 9% ازت،4% فسفر، 7% پتاس ومقادیر لازم از عناصر پر ارزش (روی،آهن،منگنز،بر،مولیبیدن،ویتامینها منجمله ویتامین ب و هورمونها ی رشد مخصوص صیفی ،غلات و انواع گیاهان زراعی 5در 1000 که 3تا4 نوبت 2 هفته
در میان استفاده شود.
4/3/86جمعه بازکشت گیاهان سوخته و برداشته شده و آبیاری (بابت کار آقای
مهندس فصاحت)

5/3/86 شنبه کشت بار چهارم دیسکتهای تحت تنش خشکی در پ د آ پس از 8
ساعت توقف رشد توسط محلول آنلین
دوشنبه 14/2/86 تلقیح گیاهان در گلخانه : بهترین ایزوله از نظر توان بیماریزایی و مقاومت به خشکی و میزان اسپورزایی بررسی و انتخاب شد سپس به غلظت مناسب برای تلقیح گیاهان کشت شده رسی و بعد اسپور پاشی در سطح خاک هر گلدان به میزان 10میلی لیتر یا 10000ماکرولیتر انجام شداینکار به کمک ماکروپیپت 5000 میکرولیتری انجام شد.گلدانهای شاهد به اندازهء 10000ماکرولیتر با آب مقطر آب پاشی شد.مقایسهء این دو سری گیاه یعنی شاهد با گیاهان تلقیح شده می تواند گویای تاثیرگذاری اسپورهای این ایزوله و دامنهء میزبانی آن روی این گیاهان باشد. در روز 144/2/86 تلقیح روی گندم ،
جو،یونجه وذرت انجام شد.
تعیین شده بود. غلظت مناسب جهت تلقیح گیاهان وپاشش
روی خاک گلدانها

19/3/86 ادامهء تلقیح انجام شد تمام گیاهان در ابتدای زمان حساس رویشی (باردهی و گلدهی) بودند(نخود ،کدو،خیار،چغنرقند،توتون،اسپرس،لوبیا قرمز،
سویا،آفتابگردان)
پس از تلقیح ده میلی لیتراسپور در روی خاک هر گلدان مختصری آبیاری انجام شد

5/4/86 سه شنبه ساخت دو محیط کشت ریچارد و نیمه تعریف شده با دو درصد گلیسرول 0 و5 درصد با پ هاش 6.5 برای دو ایزولهء 2و6 برای هر تیمار 4 تکرار در نظر میگیریم مثل آزمایش قبلی و رویهم 32 فلاسک داریم اینکار جهت تکرار آزمایش جوانه زنی اسپورهای هر دو ایزوله در شرایط خشکی رطوبت 5 درصد و دمای 20 درجه انجام می شود طی 5 هفته اینبار طول لوله های تندشی
هم اندازه گیری می شود.

10/4/86 تلقیح گیاهان دامنهء میزبانی با ایزولهء 2 پ هاش 6.5 و گلیسرول 0
درصد محیط کنیدی در میلی لیتر نیمه تعریف شده با غلظت
طبق فرمول زیر برای تولید هر 10 میلی لیتر از سوسپانسیون با غلظت
کنیدی باید به مقدار 43.859 ماکرولیتر آب با هر 9956.141 ماکرولیتر از
سوسپانسیون ایزوله مخلوط شود.

پس از یک ماه که از اسپور پاشی برای تعیین دامنهء میزبانی گذشت هیچ علامتی حاکی از تولید بیماری توسط این دو ایزوله از قارچ در گیاهان ذکر شده دیده نشد با ذکر این مطلب که اسپورپاشی برای برخی از گیاهان که محصول مشخصی مثل سنبله در گندم داشتند علاوه بر اینکه موجب بیماری نشد بلکه به نظر می رسید سرعت رشد و رسیدگی فیزیولوژیک را در گندم و جو بالا برد و نیز اندازهء خوشه ها را افزایش داد به همین خاطر قرار شد برای اثبات و پی بردن به علت این امر آزمونی با بذور این گیاهان انجام گیرد که پس از آلوده شدن به سوسپانسیون این دو ایزوله سرعت جوانه زنی رشد و عملکرد در آنها
سنجیده شود .این کار موکول شد به تاریخ1/5/86
10 /4/86 تعیین پ هاش محیط های کشت ریچارد و نیمه تعریف شده و اتوکلاو
ظروف و محیط های کشت
قلمه زدن حسن یوسف ها
کشت مجدد بذر گوجه فرنگی جهت نشاء

11/4/86 مجددا اتوکلاو ظروف
14/4/86 کشت هر دو ایزولهء 502و506 در دو محیط کشت که به میزان 50 میلی لیتر در هر فلاسک درریخته شده بودند کشت از قارچ کشت داده شده در محیط پ د آ انجام شد به کمک وسای استریل و زیر هود پس از کشت فلاسکها در
روی شیکر چرخان گذاشته شدند
دمای هوای آزمایشگاه در این زمان 26 به اضافه و منهای 2 درجهء سانتی گراد بود ولی در آزمایشات قبلی همین مرحله در دمای 22 به اضافه و منهای 2
درجهء سانتی گراد بود.
ورقهای نیمه تراوا مخصوص تولید دیسکت های وسکینز پس از شستشو اتو کلاو شد سپس روی کاغذ تمیزی گذاشته و زیر کتاب با وزن زیاد گذاشته شد تا خشک شود.اینکار جهت صاف و مرتب خشک شدن این ورقها انجام می شود.
15/4/86چرخاندن فلاسکها پس از خاموش کردن شیکر
خیس کردن بذر سوروف گیلان و برنج شفق
در تاریخ 20/4/86 شمارش اسپور پس از 6 روز سپس ساختن محیط کشت جامد با آگار که 15 گرم آگار برای هر لیتر آب کافی است سپس حرارت به مدت نیم ساعت و بعد اتوکلاو آن و انتقال به ظروف پتری دیش استریل و بسته بندی
آنها .
پ هاش محیط کشت جامد آگار روی 6.5 تنظیم شد با کمک دستگاه پ هاش سنج
افزایش پ هاش با
کاهش دادن پ هاش با

20/4/86 چهارشنبه شمارش اسپور و درست کردن محیط کشت پ د آ که با پی
اچ 6.5 تنظیم شد
23/4/86 ساخت محیط کشت ریچارد و نیمه تعریف شده و رساندن به پی اچ 6.5
واتوکلاو ظروف با دو درصد گلیسرول 0 و 5%
24/4/86
فیلتر کردن همهء تیمارها (هر دو ایزوله)وشمارش اسپورها و کشت دادن قارچ با ریختن حجم مورد نظر از سوسپانسیون در هر فلاسک که حاوی 100 سی سی محیط کشت است تعیین مقدار حجمی که باید از هر سوسپانسیون قارچ برای
کشت مجدد به کار برده شود باکمک فرمول زیر میسر است.
ابتدا 100میلیلیتر از هر دونوع محیط کشت د اخل فلاسکهایی که روی آنها را نوشتم و نوع ایزوله و نوع میط کشت و درصد گلیسرول و تاریخ کشت را تعیین کردم ریخته می شودسپس طبق محاسباتی که در بالا ذکر شده با مقدار حجم مناسب از هر سوسپانسیون اسپور مربوطه به کمک میکروپیپت زیر هود استریل داخل فلاسکها ریخته شد سپس فلاسکهای آماده که کشت قارچ در آنها انجام شده را روی شیکر گردان قرار دادم تا در دو مرحلهء 3 و 6 روز اسپورشماری و
سپس مراحل بعدی را انجام دهم .

در همین تاریخ با استفاده از همین تیمارها پس از محاسبهء تعداد اسپور و
رساندن غلظت
در میلی لیتر به میزان 10 کنیدی های سوسپانسیون هر تیمار ذکر شده
میلی لیتر از این سوسپانسیون را برای تلقیح هر یک از گلدانهای حسن یوسف به
شکل خاک پاشی استفاده می کنیم.
تهیهء سوسپانسیون مناسب برای اسپورپاشی روی حسن یوسف ها به کمک
فرمولهای زیر:

بذر گل جالیزکه در دمای 4 درجهء سانتی گراد دو هفته نگه داشته می شود تا خوابش شکسته شود و برای جوانه زنی نیاز به دورهء تاریکی داردرویهم 30 گلدان حسن یوسف تلقیح عصر روز 24/4/86 انجام شد.10 میلی لیتر پای هر گلدان از سوسپانسیون آماده شده ریخته شد و سپس آبیاری مختصری انجام شد.

کشت دادن دو ایزولهء 502 و506 در محیط کشت جامد پ د آ که پس از 5 تا 6
روز بتوان آن را جهت اسپرزایی به محیط کشت مایع منتقل کرد.
31/4/86پر کردن 60 گلدان از خاک استریل جهت نشاء گوجه فرنگی ها
نشاء گوجه فرنگی ها در 60 گلدان مثل حسن یوسفها انجام شد و اسپور پاشی محول شد به هفتهء بعد فقط اتکت ها گذاشته شد، 18 تیمار و هر تیمار 3 تکرار.

ابتدا گوجه فرنگی هایی که ریشه های آنها به گل چالیز آغشته به محلول تحریک کنندهء جوانه زنی یا همان جی آر 60 آلوده شده بود در گلدانهای دو کیلویی استریل با خاک استریل با پی اچ 7.5 کشت و سپس بعد از یک هفته به اسپور قارچها ی دو ایزوله اسپورپاشی می شوند روی هر گلدان بر چسب مخصوص خودش چسبانده میشود که پس از دو ماه بتوان نتایج بدست آمده را مشاهده کرد. که بذر های گل جالیز را پس از نیم ساعت خواباندن در آن با ریشهء GR24= GR60محلول گوجه فرنگی مخلوط کردیم موجب تحریک گل جالیز به جوانه زنی شده و مادهء شیمیایی مشابه زنوگنوسین است که کار تحریک گل جالیز را به جوانه زنی به خوبی زنوگنوسین که از ریشهء میزبان آن باید ترشح شود انجام می دهد.محلول جی ار 10 در صد تهیه می شود یعنی هر 10 میلی
لیتر آب 1 میلی لیتر هم از جی آر ریخته می شود.
در تاریخ 1/5/86 شمارش و بررسی تعداد گل جالیز ها در گلدانهای حسن یوسف
جهت تشخیص میزان تاثیر اسپورپاشی با هر دو ایزوله انجام شد.
در همین تاریخ یعنی 1/5/86 پس از تعیین غلظت اسپورها در دو سوسپانسیون ایزولهء 2و 6 که در تاریخ14/4/86 کشت داده وپس از 6 روز ماندن روی شیکر
این سوسپانسیون تهیه شده از: بود سوسپانسیونهایی با غلظت
1.ایزولهء 6 گلیسرول 0% نیمه
2. ایزولهء 2 کلیسرول 0% نیمه
این دو تیمار چون در تعیین دامنهء میزبانی تاثیر جالبی بر رشد و سرعت رسیدگی در گندم و جو داشتند انتخاب شدند.سپس به میزان 5000 ماکرولیتر از سوسپانسیون تهیه شده از این دو ایزوله با غلظت ذکر شده به هر پتری دیش ها که سه خانه ای بودند و قبلا از بذرهای گندم و جو و گوجه فرنگی در آنها ریخته شده بود ریخته شد تکرار در این آزمایش 6 عدد در نظر گرفته شد و شاهد هم با 6 تکرار از هر 3 گیاه که با 5000ماکرولیتر آب مقطر استریل تغذیه شده بود ،بود.پتری دیش ها برای جوانه زنی بذرها در دستگاه ژرمیناتور با دمای 27 درجهء روز به مدت 16 ساعت روشنایی و 8 ساعت تاریکی و دمای شب 22
درجه قرار داده شدند .نتایج هر روز بررسی شد.

تعداد بذرهای جوانه زده در Xبا کمک فرمول تعداد روزهای پس ازکشت جوانه
زنی
بر کل تعداد روزها ی لازم برای جوانه زنی =سرعت جوانه زنی همان روز
می توان سرعت متوسط جوانه زنی را در هر تکرار برای بذور سنجید
در هر پتری دیش 10 بذر گذاشته شده

1