بسم الله الرحمن الرحیم
مقایسه ارزش تشخیصی سطح اینترلوکین 6با CRP و I/T ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
مقدمه و معرفی طرح :
sepsis از مشکلات مهم و شایع نوزادان همراه با مرگ و میر بالا خصوصاً در نوزادان نارس با وزن پایین : لذا شناخت این بیماری و عوامل ایجاد کننده و به ویژه تشخیص عوامل مساعد کننده دارای اهمیت بسیار
سپسیس نوزادی یک سندرم بالینی که بصورت باکتریمی همراه با علائم سیستمیک در ماه اول عمر مشاهده
شامل انواع: زودرس (از تولد تا روز هشتم) و دیررس (از روز هشتم تا روزبیست و هشتم) و بیمارستانی (از روز هشتم تا زمان ترخیص)با علائم بالینی خاص و بعضاً مشترک
مقدمه و معرفی طرح :
علائم بالینی سپسیس نوزادی غیراختصاصی و امکان اشتباه شدن با یکسری ازاختلالات غیرعفونی مثل سندرم آسپیراسیون و سندرم دیسترس تنفسی
تشخیص سریع و زودهنگام این بیماری کمک کننده به کاهش مرگ ومیر ناشی از سپتیسمی در نوزادان
تشخیص سپسیس براساس نشانه های بالینی و یافته های آزمایشگاهی : اگر چه هیچیک اختصاصی نیستند
علائم بالینی معمولاً غیر اختصاصی و گاه هم بیماری بدون علامت
آزمایشات کمک کننده به تشخیص سپسیس نوزادی : شمارش کامل لکوسیتها ، نوترفیل ها ، پلاکت ها ، نسبت نوتروفیل های نابالغ به کل نوتروفیل ها (I/T) و پروتئین واکنشی C
ذکر حساسیت و اختصاصیت متفاوت برای هر یک از آزمایشات فوق در مطالعات مختلف
مقدمه و معرفی طرح :
استاندارد طلایی برای تشخیص سپسیس نوزادی جداسازی میکروارگانیسم ایجاد کننده توسط کشت خون
امروز تکنیکهای پیشرفته تر مثل سیستم BACTEC ارائه نتایج در مدت 24-12 ساعت و حساسیت 90 درصد
نتیجهکشت خون در اکثر موارد پس از 24 الی 72 ساعت از نمونه گیری به اطلاع پزشک رسیده، در نتیجه بسیاری از پزشکان، نوزادان مشکوک به سپسیس و در معرض خطر را تحت درمان آنتی بیوتیکی قرارداده تا نتایج حاصل از آزمایشات مختلف وجود سپسیس را رد یا تائید
این عمل علاوه براینکه اثرات جانبی داروهای آنتی بیوتیکی، مستلزم بستری شدن طولانی مدت در بیمارستان و افزایش هزینه درمان
از طرف دیگر آنتی بیوتیک های مورد استفاده بسیار گران و مصرف بی رویه آنها دارای مقاومت دارویی
مقدمه و معرفی طرح :
از اینرو برای تشخیص سریعتر سپسیس تستی مورد نیاز که حساسیت و ویژگی بالا داشته و سریعتر از کشت خون به تشخیص و درمان نوزاد کمک نماید
آنالیز مدیاتورهای ایمونولوژیک ممکن است کمک کننده به تشخیص قطعی و به موقع سپسیس
توجه به اندازه گیری سایتوکینها به عنوان مارکرهای سپسیس در سالهای اخیر
سایتوکینها پیام رسانهای پلی پپتیدی با وزن مولکولی پائین که بوسیله ماکروفاژها و لنفوسیت ها در پاسخ به تحریکات آنتی ژنی و یا محصولات حاصل از التهاب ایجاد
مقدمه و معرفی طرح :
مطالعات قبل نشان داده : غلظت سایتوکین های پیش التهابی، و اینترلوکین شش (IL -6) و اینترلوکین هشت(8 -IL) در سپسیس انسانی افزایش
IL-6 یک مدیاتور اولیه اصلی در پاسخ التهابی به عفونت و به حداکثر رسیدن غلظت آن بلافاصله بعد از باکتریمی
درحالیکه افزایش غلظت ) CRPچندین ساعت بعد (
باتوجه به اینکه سپسیس یکی از مهمترین علل مرگ و میر و ناتوانی در دوره نوزادی : با تشخیص و درمان به موقع بیماری و با بهبود کیفیت مراقبت ها می توان میزان بقای نوزادان را افزایش داد
هدف از این تحقیق بررسی حساسیت و ویژگی و ارزش اخباری مثبت و منفی 6- IL در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی و مقایسه آن باCRP و I/T ratio
بررسی متون
Boskabadi H و همکاران 2013
هدف مطالعه بررسی سرم اینترلوکین 6 و 8 و 10 به عنوان مارکرهای اولیه عفونت نوزادان و ارتباط آن با مرگ ومیر و پیش اگهی آنها
84 نوزاد با ≥ سن 72 ساعت در دو گروه مورد و شاهد تقسیم : گروه مورد 41 نفر (نوزادان با یافته های بالینی و آزمایشگاهی سپسیس و کشت خون و مایع بند ناف مثبت )و گروه مورد 43 نوزاد سالم
ادامه
نتایج : تفاوت معنادار آماری بین گروه مورد و شاهد در سطح اینترلوکین 6 و 8 و 10 (P<0.001).
مقدار برش اینترلوکین 6 10.85 Pg/ml : برای تمیز بین گروه مورد و شاهد و 78.2 Pg/ml برای پیش بینی مرگ استفاده
مقدار برش اینترلوکین 8 60.05 Pg/ml برای تفاوت بین عفونت قطعی و نامعین
بنابراین اینترلوکین 6 و 8 و 10 بطور همزمان می تواند حساسیت و ویژگی تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی را ارتقاء دهد
اینترلوکین 6 دارای بالاترین ارزش برای پیش بینی عفونت و مرگ احتمالی در حالی که IL-8 با ارزش برای تشخیص عفونت قطعی
بررسی متون
Janota و همکاران 2000 در مطالعه اینترلوکین 6 ، پروکلسیتونین ، سی ریکتو پروتئین و نسبت نوتروفیل های نابالغ به کل نوتروفیل ها در تشخیص سپسیس زود هنگام در نوزادان با وزن خیلی پایین
هدف مطالعه : تعیین تاثیر سپسیس زود هنگام نوزادی بر اینترلوکین 6 وسطح پروکلسیتونین و ارزیابی معنی داری مارکر معمولی عفونت crp و I/Tratioو مارکر جدید پرولاکتین و اینترلوکین 6 بر تشخیص سپسیس زود هنگام نوزادی
مطالعه از نوع مطالعات بالینی آینده نگر و در موسسه مراقبت از مادر و کودک چک
اندازه گیری سطح اینترلوکین 6 و پروکلسیتونین سرم در خون بند ناف در 37 نوزاد کم وزن کمتر از 35 هفته حاملگی
اندازه گیریIL-6 و سطح PCT همراه با CRP و I / T در خون نوزاد در 2 ساعت بعد از زایمان
بررسی متون
نتایج: تفاوت در مقادیر متوسط CRP، I / T، IL-6، و PCT بین گروه "عفونت به اثبات رسیده" و "عفونت ثابت نشده" از نظر آماری معنی دار نبود
تنها نشانگر نسبتا حساس و متوسط پیش بینی از عفونت زودرس در نوزاد نارس با وزن کم در PCT خون بند ناف مطالعه ما بود
بررسی متون
Kocabaş و همکاران 2007 : مطالعه نقش پروکلسیتونین ، crp ، اینترلوکین 6 و اینترلوکین 7 و فاکتور آلفا نکروز تومور در تشخیص عفونت نوزادی
هدف مطالعه: بررسی نقش پروکلسیتونین (PCT)، پروتئین واکنشی C (CRP)، اینترلوکین (IL) -6، IL-8 و تومور نکروز فاکتور آلفا (TNF آلفا) در تشخیص و ارزیابی پیش آگهی عفونت های نوزادان
بیست و شش نوزادان با مثبت شدن کشت خون و عفونت بالینی، در واحد مراقبت های ویژه نوزادان به دلیل شک بالینی سپسیس نوزادی بستری شدند گروه I) )و 29 نوزاد سالم در واحد نوزادان و درمانگاه های سرپایی این بیمارستان پیگیری شدند گروه II) ) در همان دوره مورد مطالعه قرار گرفتند
بررسی متون
در میان نوزادان سپتیک، 13 سپسیس نوزادی زودرس (گروه IA) و 13 شروع دیر هنگام سپسیس نوزادی (گروه IB) داشتند در حالی که 14 نوزاد سالم عوامل خطر پری ناتال را داشتند و نفر 15 از آنها بدون عوامل خطر بودند
مشخصات دموگرافیک و بالینی نوزادان سپتیک و نوزادان سالم ثبت و نمونه خون برای تعیین PCT سرم ، CRP ، IL-6 ، IL- 8 و TNF -a از افراد سالم و نوزادان سپتیک قبل از شروع درمان جمع آوری شد و این تحقیقات در روز 3 و 7 از درمان انجام شد
نتایج نشان داد : الف:میانگین PCT CRP، IL-6، IL-8 و سطح TNF-آلفا سرم، قبل از درمان در نوزادان سپتیک به طور قابل توجهی بالاتر از افراد سالم بود
بررسی متون
حیدر زاده و همکاران 1390 : مطالعه بررسی ارزش سطح اینترلوکین 6 در پیشگویی سپسیس زودرس نوزادان ترم
تعیین سطح پلاسمایی اینترلوکین6 در 142 نوزاد ترم بستری در بخش در بیمارستان شهید بهشتی کاشان
نتایج : 74 نوزاد پسر و 68 نوزاد دختر بررسی
شیوع سپسیس نوزادی 7 درصد و عوامل باکتریال شایع آن استرپ گروه B و استاف اپیدرمیدیس و شایعترین علامت منجر به بستری تاکیپنه
میانگین سطح اینترلوکین 6 در گروه اول (بستری با شک به عفونت و کشت خون مثبت) 65/1445 و در گروه دوم (بستری با شک به عفونت و کشت خون منفی ) 79/14 و در گروه سوم (نوزادان بدون شک به سپسیس و بستری به علت زردی )04/11 پیکوگرم در دسی لیتر. (.(P=0/ 001
نتیجه گیری : سطح پلاسمایی اینترلوکین 6 در تشخیص سپسیس زودرس نوزادی دارای ارزش پیشگویی کننده
هدف اصلی
مقایسه ارزش تشخیصی اینترلوکین6 با CRP و I/ T ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
اهداف ویژه
تعیین حساسیت تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ویژگی تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ارزش اخباری مثبت تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ارزش اخباری منفی تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین حساسیت تست CRPدر تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ویژگی تست CRP در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ارزش اخباری مثبت تست CRPدر تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ارزش اخباری منفی تست CRPدر تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین حساسیت تست I/T ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ویژگی تست I/ T ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ارزش اخباری مثبت تست I/ T ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
تعیین ارزش اخباری منفی تست I/ T ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
مقایسه حساسیت ، ویژگی ، ارزش اخباری مثبت و منفی تست اینترلوکین 6 با CRP در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
مقایسه حساسیت ، ویژگی ، ارزش اخباری مثبت و منفی تست اینترلوکین 6 با I/ T ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
اهداف کاربردی :
تعیین و استفاده از تست تشخیصی مناسب تر در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی
سوالات
حساسیت تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ویژگی تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ارزش اخباری مثبت تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ارزش اخباری منفی تست اینترلوکین 6 در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
حساسیت تست CRPدر تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ویژگی تست CRP در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ارزش اخباری مثبت تست CRPدر تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ارزش اخباری منفی تست CRPدر تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
حساسیت تست I/P ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ویژگی تست I/P ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ارزش اخباری مثبت تست I/P ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
ارزش اخباری منفی تست I/P ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چقدر است ؟
حساسیت ، ویژگی ، ارزش اخباری مثبت و منفی تست اینترلوکین 6 در مقایسه با CRP در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چگونه است ؟
حساسیت ، ویژگی ، ارزش اخباری مثبت و منفی تست اینترلوکین 6 در مقایسه با I/P ratio در تشخیص زود هنگام سپسیس نوزادی چگونه است
روش اجرا
در این مطالعه از50 نوزاد مشکوک به سپسیس که در سال 1393 در بخش مراقبت های ویژه نوزادان(NICU) بیمارستان شهید صدوقی
نوزادانی که دو تا سه علامت سپتی سمی، به همراه یکی از ریسک فاکتورهای مادری و یک مورد از ریسک فاکتورهای نوزادی برای سپسیس غربالگری :
پزشک متخصص دستور آزمایشات روتین برای تشخیص سپتی سمی داده، خونگیری انجام
روش اجرا
مقدار5 0 /میلی لیتر از سرم این نوزادان بعد از جداسازی برای اندازه گیری CRP و IL- 6در فریزر منفی 70 درجه نگهداری و بقیه خون نوزاد برای انجام کشت خون و دیگر تستها به آزمایشگاه فرستاده
بعد از آماده شدن جواب کشت خون و بررسی و پیگیری علائم کلینیکی نوزادان در دو گروه دسته بندی :
گروه اول :نوزادانی که کشت خون آنها مثبت . گروه دوم: نوزادانی که کشت خون آنها منفی
نوع و روش مطالعه
مطالعه توصیفی – تحلیلی از نوع مقایسه ای
روش نمونه گیری وتعیین حجم نمونه
نمونه گیری با روش آسان و متوالی به این نحو که از زمان شروع مطالعه کلیه نوزادانی که معیارهای ورود به مطالعه را داشته باشند به عنوان نمونه انتخاب می شوندحجم نمونه با فرمول کوکران 50 نفر تعیین شد
روش جمع آوری داده ها بصورت دقیق
اندازه گیری IL6-به روش :ELISA میزان IL- 6 بوسیله کیت ELISA تهیه شده از شرکت Bender Med System و با استفاده از از روش Capture- Sandwich اندازه گیری خواهد گردید از میکروپلیت های پوشیده شده ازمونوکلونال آنتی بادی علیه IL6استفاده شده ابتدا μl 50 از سرم هر بیمار با μl.50 بافر مخصوص به هر چاهک (Assay buffer) اضافه کرده ، از استاندارد نیز رقت های سریال تهیه شد و به چاهک های مربوط اضافه گردید .50 μl آنتی اینترلوکین 6 مونوکلونال که با بیوتین کونژوگه شده، به همه چاهکها افزوده شد. پس از 2 ساعت انکوباسیون درحرارت اطاق روی روتاتور و چهار بار شستشو Streptavidin-HRP100 μl،به همه چاهک ها اضافه شده و بعد از یک ساعت انکوباسیون در حرارت اطاق و چهار بار شستشو100μl از محلول TMB Substrate به درون چاهک ها ریخت شد و پس از 15 دقیقه واکنش با محلول stopping متوقف شده. ومحتویات پلیت با ELISA reader در طول موجهای 450 و 620 خوانده شد و پس از رسم منحنی استاندارد ، IL6 غلظت از روی منحنی محاسبه گردید.
روش جمع آوری داده ها بصورت دقیق
انداز ه گیری CRP به روش نفلومتری : ابتدا تمامی نمونه ها توسط محلول رقیق کننده مخصوص نفلومتری (nephlometry sample diluent) به نسبت 1/ 40 رقیق گردید مقدار 20 μl. از هر نمونه سرم را با یک هم زن stiring bar) مغناطیسی در یک کووت ریخته و در مخزن کووت دستگاه نفلومتری قرا ر گرفت و سپس مقدار400 μl ازبافر مخصوص CRP Buffer) CRP وCRP reagent 40μl به کووت اضافه و همزمان کووت بداخل مخزن دستگاه فشارداده شد . در این واکنش CRPموجود در سرم با آنتی بادی موجود در میکروپارتیکل های پل یاستیرینی(polystyrene microparticle) کمپلکس آنتی ژن و آنتی باد ی تشکیل میدهد و کمپلکس ها ی ایمنی ایجاد شده در مقابل نور لیزر دستگاه قرار می گیرند. شدت تفرق نور لیزر که با دستگاه انداز ه گیری میشود با غلظت CRPدر نمونه متناسب است.
کشت خون با استفاده از محیط کشت PEDS (مخصوص اطفال) و توسط دستگاه BACTEC9120 ساخته شده توسط شرکت BD آمریکا انجام خواهد شد
روش تجزیه و تحلیل داده ها
داده های این مطالعه، پس ازجمع آوری و تکمیل پرسشنامه توسط نرم افزاری آماریSPSS. ویرایش 16 و تجزیه و تحلیل با استفاده از آمار توصیفی (شاخص مرکزی و پراکندگی) و آمار تحلیلی (آزمون آماری تی )
روش تجزیه و تحلیل داده ها
حساسیت به معنی نسبتی از موارد مثبت است که آزمایش آن ها را به درستی به عنوان مثبت علامت گذاری می کند. ویژگی به معنی نسبتی از موارد منفی است که آزمایش آن ها را به درستی به عنوان منفی علامت گذاری می کند.
مثبت حقیقی
100 * ————————– = حساسیت
منفی کاذب +مثبت حقیقی
منفی حقیقی
100 * ————————– = ویژگی
مثبت کاذب + منفی حقیقی
روش تجزیه و تحلیل داده ها
ارزش اخباری ، بازتاب توان تشخیصی آزمون است . دقت ارزش اخباری به عواملی نظیر حساسیت، ویژگی و شیوع بیماری بستگی دارد و شامل ارزش اخباری مثبت و منفی می باشد.
ارزش اخباری مثبت (Positive Predictive Value =PPV) نشان دهنده میزان احتمالی است که بیمارِ
واقعا دچار بیماری می باشد. ارزش اخباری مثبت را از تقسیم موارد مثبت PPV واقعی بر کل پاسخ های مثبت، به دست می آوریم.
ارزش اخباری منفی (Negativ Predictive Value = NPV)نشان دهنده میزان احتمالی است که
فردِ سالمِ آزمون منفی، واقعا دچار بیماری نباشد و از تقسیم منفی های واقعی بر کل موارد منفی به دست می آید.
ارزش اخباری مثبت =مثبت حقیقی = a
مثبت ها a + b
ارزش اخباری منفی =منفی حقیقی = d
منفی ها c + d
ملاحظات اخلاقی
درابتدا پژوهش به والدین نوزادان در مورد مطالعه ، هدف آن و چگونگی اجرا شرح داده شده و رضایت نامه کتبی کسب و در صورت رضایت والدین نوزاد وارد طرح گردید
با تشکر